| 研究課題/領域番号 |
14657054
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| 研究種目 |
萌芽研究
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
実験病理学
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| 研究機関 | 弘前大学 |
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研究代表者 |
土田 成紀 弘前大学, 医学部, 教授 (20142862)
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| 研究分担者 |
早狩 誠 弘前大学, 医学部, 助教授 (80156421)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2004
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| 研究課題ステータス |
完了 (2004年度)
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| 配分額 *注記 |
3,200千円 (直接経費: 3,200千円)
2004年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
2003年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
2002年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
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| キーワード | 卵巣がん / 転移 / カルボニル還元酵素 / 血管内皮細胞増殖因子 / hypoxia-inducible factor |
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| 研究概要 |
1 カルボニル還元酵素による血管内皮細胞増殖因子(VEGF)遺伝子発現とp53タンパク質レベルの変化
マウスカルボニル還元酵素(CR)の発現ベクターをヒト卵巣がん細胞株A2780などにリポフェクトアミンを用いて導入した。トランスフェクトした細胞を10%ウシ胎児血清を含むRPMI1640培地で培養した。細胞数はAlamar Blue法で測定し、細胞形態は位相差顕微鏡で観察した。CR、VEGF、p53の発現をウエスタンブロット法で検討した。CR発現ベクターの導入により卵巣がん細胞でCRの発現を認めた。CR発現に伴い、細胞増殖や細胞形態に明らかな変化を認めなかったが、VEGFの発現は低下した。また、CRを発現した細胞、コントロールの細胞ともにp53タンパク質は検出できなかった。
ヒト卵巣がん細胞の抗がん剤、ドキソルビシンに対する感受性が、CRの発現に伴い変化するか検討した。ドキソルビシンによる卵巣がん細胞増殖抑制の程度は、CR発現の有無で明らかな変化を認めなかった。
2 CRによる発現抑制に係わるVEGF遺伝子のしスエレメントの検討
CRの発現によりVEGFのどのタイプが発現抑制を受けるのか、VEGF-A、B、C、Dの各抗体を用いてウエスタンブロット法で検討した。CRにより制御を受けるのはVEGF-Dと同定された。現在、VEGF-D遺伝子のプロモーター領域のコンストラクトを作製し、A2780細胞にトランスフェクトし、CRによる発現抑制に係わる領域を明らかにする準備を進めている。
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