研究課題/領域番号 |
14770761
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研究種目 |
若手研究(B)
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配分区分 | 補助金 |
研究分野 |
麻酔・蘇生学
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研究機関 | 東京医科歯科大学 |
研究代表者 |
金子 高穂 医科歯科大, 医学部附属病院, 助手 (90334424)
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研究期間 (年度) |
2002 – 2003
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研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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配分額 *注記 |
2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
2003年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
2002年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
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キーワード | neuron / ischemic preconditioning / ATP sensitive potassiun channel / glutamate transporter / northern blot / western blot |
研究概要 |
胎生16日のラットから大脳皮質を取り出し、neuronの初代培養を行った。 培養1週間後に、ischemic preconditioning(IP)群はブドウ糖不含のEagle's balanced salt solutionでO_2 1%で60分間培養した(oxygen-glucose deprivation : OGD)。対照群は1%ブドウ糖含のEagle's balanced salt solutionでO_2 21%で60分間培養した。 IP24時間後のneuronの初代培養からmRNAを抽出し、RT-PCR法を用いてGAPDH、HSP70のmRNAの変化を対照群と比較することによって、IPが確立されていることを証明した。またLDH測定法により、IPによるneuron死が認められないことも確認した。さらに180分間のOGDを負荷し、細胞外デルタミン酸濃度測定とLDH測定法および細胞生存試験によるneuron死測定を行い、IPの効果を確認した。 IP1、3、5、7日後のneuronの初代培養からmRNAを抽出し、northern blot法を用いてGAPDH、Kir6.2、SUR1、EAAC1のmRNAを調べるために、non-RI法によるprobeを作成した。 今後northern blot、western blotを予定している。またdiazoxide(mitochondria KATP agonist)、5-HD(mitochondria KATP antagonist)、isofluraneによるIPも検討する。
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