レトロウイルス遺伝子導入システムを用いた眼免疫疾患発症機構の解析

• 研究課題/領域番号: 14770961
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 眼科学
• 研究機関: 高知大学(医学部)
• 研究代表者: 福島 敦樹 高知大学, 医学部附属病院, 助手 (40281737)
• 研究期間 (年度): 2002 – 2003
• 研究課題ステータス: 完了 (2003年度)
• 配分額: 3,400千円 (直接経費: 3,400千円); 2003年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円); 2002年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
• キーワード: 抗原特異的T細胞 / 結膜 / 活性化 / シグナル伝達 / サイトカイン / ケモカイン / マクロファージ / 好酸球 / アレルギー性結膜疾患 / IFN-γ / 免疫抑制剤 / T細胞 / 抗原特異性 / レトロウイルス / 遺伝子導入

研究概要

本年度は以下の点が明らかとなった.
1.結膜における抗原特異的T細胞の検出.
抗原特異的T細胞をCFSEでラベルする,あるいはT細胞受容体トランスジェニックマウスを用いることにより抗原点眼により抗原特異的T細胞が結膜に浸潤することが明らかとなった.
2.抗原特異的T細胞の結膜局所での活性化.
抗原特異的T細胞を移入し4日後,抗原を点眼し経時的に結膜を採取し,蛋白抽出を行い,Lck免疫沈降物のリン酸化を検討したところ,点眼6時間目よりLckのリン酸化を認めたことから,T細胞は結膜で抗原点眼6時間目より活性化されることが判明した.
3.結膜におけるサイトカイン,ケモカインの動き
抗原特異的T細胞の移入により誘導した眼瞼結膜炎の結膜からRNAを抽出し,RT-PCR法で種々のサイトカイン,ケモカインの発現を検討した結果,Th1型のサイトカインは6時間目より発現を認め,以後48時間目まで持続することがわかった.一方,Th2型のサイトカインは6時間目,12時間目に発現のピークを認め,以後減弱することが判明した.これらのサイトカインの動きは浸潤細胞の表現型の動きと一致していた.すなわち,マクロファージは6時間目以降徐々に増加するが,好酸球は12時間目をピークに以後減弱していた.
4.ラット系統間でのIFN-γシグナルの差
ルイスラットとブラウンノルウェーラット間でIFN-γレセプターの発現の差と,IFN-γシグナル伝達の強度の差を見出した.この結果は,遺伝背景の違いにより,IFN-γの関与に差があることを示唆するものである.
これらの結果は治療のタイミングを含め,レトロウイルスを用いた遺伝子治療に役に立つ基礎的データとなる.

研究成果

• [文献書誌] Ozaki A et al.: "Mast-cell activation augments the late phase reaction in experimental immune-mediated blepharoconjunctivitis."Graefe's Arch.Clin.Exp.Ophthalmol.. 241. 394-402 (2003)
• [文献書誌] Koike T et al.: "A novel ERK dependent signaling process that regulates IL-2 expression in a late phase of T cell activation."J Biol Chem.. 278. 15685-15692 (2003)
• [文献書誌] Ikezoe T et al.: "Identification of a new GLCIA mutation in a sporadic, primary open-angle glancoma in Japan."Int J Mol Med.. 12. 259-261 (2003)
• [文献書誌] Fukushima A et al.: "Ag-Specific Recognition, Activation, and Effector Function of T Cells in the Conjunctiva Experimental Immune-Mediated Blepharoconjunctivitis."Invest Ophthalmol Vis Sci.. 44. 4366-4374 (2003)
• [文献書誌] Fukushima A et al.: "Differential expression and signaling of IFN-γ in the conjunctiva between Lewis and Brown Norway rats."Microbiol Immunol.. 47. 785-796 (2003)
• [文献書誌] Ozaki A et al.: "Detection of antigen-specific T cells in experimental immune-mediated blepharoconjunctivitis in DO11.10 T cell receptor transgenic mice."Microbiol Immunol. 48. 39-48 (2004)
• [文献書誌] 福島 敦樹: "NEW MOOK 眼科 6.アレルギー性眼疾患 III-2.実験的アレルギー性結膜疾患(ラットおよびマウス)(編集:高村悦子・熊谷直樹・大野重昭)"金原出版株式会社. 10(142-151) (2003)
• [文献書誌] Nishino K et al.: "Suppression of experimental immune-mediated blepharoconjunctivitis in Brown Norway rats by topical application of FK506"Graefe's Arch Clin.Exp.Ophthalmol.. 240. 137-143 (2002)
• [文献書誌] Fukushima A et al.: "Exertion of the suppressive effects of IFN-γ on experimental immune-mediated blepharoconjunctivitis in Brown Norway rats during the induction phase but not the effector phase"Br.J.Ophthalmol.. 86. 1166-1171 (2002)
• [文献書誌] Ozaki A et al.: "Suppression or exacerbation of experimental autoimmune uveoretinitis in Lewis rats by pretreatment with and without an autoantigenic peptide in aluminum hydroxide"Jpn.J.Ophthalmol.. 47. 102-106 (2003)
• [文献書誌] Ozaki A et al.: "Mast-cell activation augments the Late phase reaction in experimental immune-mediated blepharoconjunctivitis"Graefe's Arch.Clin.Exp.Ophthalmol.. (in press). (2003)