発育環遮断による新規予防法開発を目指したトリパノソーマ細胞分化機構の解明

• 研究課題/領域番号: 14J01442
• 研究種目: 特別研究員奨励費
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 国内
• 研究分野: 獣医学
• 研究機関: 帯広畜産大学
• 研究代表者: 菅沼 啓輔 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 特別研究員(PD)
• 研究期間 (年度): 2014-04-25 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 2,170千円 (直接経費: 1,900千円、間接経費: 270千円); 2015年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2014年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
• キーワード: トリパノソーマ / RNA結合タンパク質 / 転写後遺伝子発現調節機構 / 遺伝子発現調節

研究実績の概要

T. congolense EMFステージ特異的発現RNA結合タンパク質 （TcRBP6）のRNA結合能をRNAゲルシフト法によって解析した。まず前年度作製した遺伝子組換えTcRBP6 (rTcRBP6)と、人工合成したビオチン標識付きRNA（poly-A, G, C, ならびにU）をin vitroで混合し、標識RNA-rTcRBP6複合体形成反応後、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で展開、標識RNA-rTcRBP6複合体によるゲルシフト像を解析した。その結果、rTcRBP6はpoly-Cとのみ特異的に結合した。そのため、rTcRBP6はmRNA中のシトシンに富んだ領域に結合している可能性が示唆された。ついでTcRBP6の結合するmRNA群を特定するために、前年度作製した抗TcRBP6抗体を用いたRNA免疫沈降法により、mRNA-TcRBP6複合体を精製した。その結果、抗TcRBP6抗体を用いた免疫沈降で精製されたRNA量は、ネガティブコントロール（正常マウス抗体）を用いた免疫沈降で精製されたRNA量と比較して有意に多かった。また、免疫沈降により得られたmRNAを次世代シーケンサーで網羅的に解析した結果、EMFステージ特異的に発現する遺伝子群や遺伝子発現調節機能を持つと考えられるRNA結合タンパク質が複数同定された。以上より、TcRBP6はT. congolense EMFで発現する特定の遺伝子RNAに結合し、その発現時期を制御していると考えられる。

現在までの達成度 (段落)

27年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

27年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Novel methods for the molecular discrimination of Fasciola spp. on the basis of nuclear protein-coding genes (2016)
  • 著者名/発表者名: Takuya Shoriki, Madoka Ichikawa-Seki, Keisuke Suganuma, Ikunori Naito, Kei Hayashi, Minoru Nakaoe, Junya Aita, Uday Kumar Mohanta, Noboru Inoue, Kenji Murakami, Tadashi Itagaki
  • 雑誌名: Parasitology International 巻: 65 号: 3 ページ: 180-183
  • DOI: 10.1016/j.parint.2015.12.002
  • 査読あり
• [雑誌論文] 特集 新興･再興感染症と感染症対策 D.原虫 アフリカトリパノソーマ症対策の現在,そして未来 (2015)
  • 著者名/発表者名: 菅沼啓輔、井上昇
  • 雑誌名: 生体の科学 巻: 66 号: 4 ページ: 339-342
  • DOI: 10.11477/mf.2425200186
  • ISSN: 0370-9531, 1883-5503
  • 年月日: 2015-08-15
• [雑誌論文] Development of monoclonal antibodies against Plasmodium falciparum thioredoxin peroxidase 1 and its possible application for malaria diagnosis (2015)
  • 著者名/発表者名: Hakimi H, Goto Y, Suganuma K, Angeles JM, Kawai S, Inoue N, Kawazu S
  • 雑誌名: Exp Parasitol 巻: 154 ページ: 62-66
  • DOI: 10.1016/j.exppara.2015.04.018
  • NAID: 120006987073
  • 査読あり
• [雑誌論文] Molecular characterization of Cryptosporidium parvum from two different Japanese prefectures, Okinawa and Hokkaido. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ichikawa-Seki M, Aita J, Masatani T, Suzuki M, Nitta Y, Tamayose G, Iso T, Suganuma K, Fujiwara T, Matsuyama K, Niikura T, Yokoyama N, Suzuki H, Yamakawa K, Inokuma H, Itagaki T, Zakimi S, Nishikawa Y.
  • 雑誌名: Parasitol Int. 巻: 64 号: 2 ページ: 161-166
  • DOI: 10.1016/j.parint.2014.11.007
  • 査読あり
• [雑誌論文] Establishment of ATP-Based Luciferase Viability Assay in 96-Well Plate for <i>Trypanosoma congolense</i> (2014)
  • 著者名/発表者名: Suganuma K, Allamanda P, Hakimi H, Zhou M, Angeles J. M., Kawazu S and Inoue N
  • 雑誌名: Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ 巻: 76 号: 11 ページ: 1437-1441
  • DOI: 10.1292/jvms.14-0273
  • NAID: 130004704128
  • ISSN: 0916-7250, 1347-7439
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] Trypanosoma congolense EMFステージ特異的RNA結合タンパク質TcRBP6の機能解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 菅沼啓輔, Marcin Jalalski, 山岸潤也, 山崎詩乃, 河津信一郎, 井上 昇
  • 学会等名: 第61回日本寄生虫学会・日本衛生動物学会北日本支部合同大会
  • 発表場所: 帯広畜産大学（北海道・帯広市）
  • 年月日: 2015-10-10
• [学会発表] The analysis of stage differentiation mechanisms of T. congolense by RNA-binding protein-RNA interaction (2015)
  • 著者名/発表者名: Suganuma K, Jakalski M, Yamagishi J,Yamasaki S, Kawazu S and Inoue N
  • 学会等名: 25th International Conference of the World Association for the Advancement of Veterinary Parasitology
  • 発表場所: リバプール（UK）
  • 年月日: 2015-08-16 – 2015-08-20
• [学会発表] The analysis of stage differentiation mechanisms of T. congolense by RNA-binding protein-RNA interaction (2015)
  • 著者名/発表者名: Keisuke Suganuma, Marcin Jakalski, Jyunya Yamagishi, Shino Yamasaki, Shin-ichiro Kawazu, Noboru Inoue
  • 学会等名: 第25回国際獣医寄生虫学会
  • 発表場所: リバプール（UK）
  • 年月日: 2015-08-16
  • 国際学会
• [学会発表] ミコフェノール酸およびその誘導体の抗トリパノソーマ活性評価 (2015)
  • 著者名/発表者名: 菅沼 啓輔、三橋 進也、岡田 只士、生方 信、井上 昇
  • 学会等名: 第84回日本寄生虫学会大会
  • 発表場所: 三鷹
  • 年月日: 2015-03-21 – 2015-03-22
• [学会発表] Expression regulation mechanisms of epimastigote stage-specific genes in African trypanosome (2014)
  • 著者名/発表者名: Suganuma K, Yamasaki Shino, Mochabo KM, Yamagishi J, Hakimi H, Kawazu S and Noboru I
  • 学会等名: 第18回日独原虫病学会
  • 発表場所: ドレスデン（ドイツ）
  • 年月日: 2014-09-30 – 2014-10-02
• [学会発表] ルシフェラーゼを利用したT. congolense HTS系の確立と道産木材樹皮からの新規抗トリパノソーマ化合物探索 (2014)
  • 著者名/発表者名: 菅沼 啓輔、三橋 進也、Puttik Allamanda、Sarwono Albertus Eka Yudistir、岡田 只士、重冨 顕吾、河津 信一郎、生方 信、井上 昇
  • 学会等名: 第156回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 2014-09-09 – 2014-09-12
• [備考] 帯広畜産大学 原虫病研究センター ホームページ
  • URL: http://www.obihiro.ac.jp/~protozoa/index.html