| 研究課題/領域番号 |
14J06159
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| 研究種目 |
特別研究員奨励費
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 国内 |
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| 研究分野 |
内分泌学
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| 研究機関 | 京都大学 (2015)
久留米大学 (2014) |
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研究代表者 |
椎村 祐樹 京都大学, 医学研究科, 特別研究員(PD)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-25 – 2016-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2015年度)
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| 配分額 *注記 |
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
2015年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
2014年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
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| キーワード | GPCR / グレリン / 構造解析 / X線構造解析 / グレリン受容体 |
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| 研究実績の概要 |
今年度はグレリン受容体の結晶構造解析に向けて、熱安定化変異体のスクリーニングおよび新規化合物による安定化効果のスクリーニング、精製グレリン受容体の結晶化に取り組んだ。
これまでグレリン受容体の結晶化に成功していない理由として、グレリン受容体自身の基礎活性が非常に高いため、安定性が低く精製が困難であることが考えられた。そこで、受容体のさらなる安定化を図るために出芽酵母を用いた変異体スクリーニングを行った。その結果、受容体の安定性を向上させる新たな点変異を3箇所見出した。この結果をもとに、発現宿主を昆虫細胞に変更し、大量培養およびアフィニティーカラムによる精製を行ったところ、これらの変異体はこれまでのコンストラクトと比較して発現量も高く、再現よく精製できることが確認された。
加えて、受託合成によってさらに2種類のグレリン受容体阻害剤を入手した。これらの阻害剤とこれまでの精製・結晶化で使用していた市販の阻害剤との熱安定性について比較検討したところ、新規阻害剤では、いずれも熱安定性が5度以上上昇することが確認された。
現在、これらの検討に基づいて精製グレリン受容体の結晶化を試みているが、これまでのところ結晶は得られていない。今後、結晶化の条件などについて細かく検討していく必要があると考えられるが、変異体のスクリーニングおよび新規阻害剤の作製によってグレリン受容体の安定化を図れたことは研究全体を通して大きな成果であり、研究は着実に進展しているものと考えられる。
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| 現在までの達成度 (段落) |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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