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真核生物染色体DNA複製フォークの分子ダイナミズム

研究課題

研究課題/領域番号 15107003
研究種目

基盤研究(S)

配分区分補助金
研究分野 分子生物学
研究機関大阪大学

研究代表者

杉野 明雄  大阪大学, 大学院生命機能研究科, 教授 (90231737)

研究分担者 川崎 泰生  大阪大学, 大学院生命機能研究科, 助手 (30243257)
岡部 勝  大阪大学, 徴生物病研究所, 教授 (30089875)
関 丘  北海道大学, 大学院先端生命科学研究院, 助手 (40271118)
奥野 友紀子  大阪大学, 大学院理学研究科, 特任研究員 (00372524)
和賀 祥  大阪大学, 大学院・生命機能研究科, 助教授 (60222402)
研究期間 (年度) 2003 – 2006
研究課題ステータス 完了 (2006年度)
配分額 *注記
95,550千円 (直接経費: 73,500千円、間接経費: 22,050千円)
2006年度: 22,100千円 (直接経費: 17,000千円、間接経費: 5,100千円)
2005年度: 22,100千円 (直接経費: 17,000千円、間接経費: 5,100千円)
2004年度: 22,100千円 (直接経費: 17,000千円、間接経費: 5,100千円)
2003年度: 29,250千円 (直接経費: 22,500千円、間接経費: 6,750千円)
キーワード染色体複製 / DNAポリメラーゼ / アフリカツメガエル / 出芽酵母 / 哺乳動物細胞 / チェックポイント / In vitro DNA複製 / ほ乳動物細胞 / pre RC(複製開始前複合体) / Mcm蛋白 / Cdc / Db4f protein kinase / GINS / Polε複合体 / アフリカツメガエル卵粗抽出液 / セントロメア / 複製開始 / pre RC (複製開始名複合体) / Dbf4 protein kinase
研究概要

1)出芽酵母染色体DNA複製開始前複合体(pre-RC)の形成反応(複製開始部位への逐次的なORC→Cdc6p→Cdt1p→Mcm2-7p複合体のLoading反応)をAFMを用い詳細に研究した。又、高度に精製した蛋白複合体を使って形成させたpre-RCにS-期に同調した出芽酵母細胞から調整した核粗抽出液を加え、試験管内において複製開始部位から特異的に開始するDNA複製反応系を確立した。
2)出芽酵母染色体DNA複製に必須なGINS, RPA, Polεポロ酵素複合体とssDNAを鋳型として使って、Leading鎖合成反応を再構成し,詳細に解析した。
3)アフリカツメガエル卵粗抽出液の染色体DNA複製反応に必要なGINS, Cut5,Polεホロ酵素複合体,Cdc45p等の蛋白複合体を精製し、GINS-Polεポロ酵素複合体,Cdc45p-Polεホロ酵素複合体,GINS-cdc45p-Cut5-Polεホロ酵素複合体形成反応を試験管内で再構成した。更に、Polεポロ酵素複合体を除去したアフリカツメガエル卵粗抽出液とDNAポリメラーゼ活性ドメインを持たないPolεホロ酵素複合体を用い、完全なPolεホロ酵素複合体が染色体複製反応に必須であることを証明した。
4)前年度に同定したマウス5番染色体上に存在する複数の複製開始部位のより詳細な解析をPCR法とDNAマイクロアレイを使用して行った。
5)出芽酵母染色体DNA複製開始に必須なCdc7-Dbf4複合体によるチェックポイント蛋白Rad53pのリン酸化による活性化機構を詳細に解析した。又、精製したRad53pが持つ一本鎖DNA部分に特異的に結合する反応を詳細に解析した。

報告書

(4件)
  • 2006 実績報告書
  • 2005 実績報告書
  • 2004 実績報告書
  • 2003 実績報告書
  • 研究成果

    (16件)

すべて 2006 2005 2004 その他

すべて 雑誌論文 (9件) 図書 (1件) 文献書誌 (6件)

  • [雑誌論文] The DNA polymerase activity of Pol epsilon holoenzyme is required for rapid and efficient chromosomal DNA replication in Xenopus egg extracts.2006

    • 著者名/発表者名
      Shikata, K.
    • 雑誌名

      BMS Biochemistry 7

      ページ: 21-21

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] The phosphorylated C-terminal domain of Xenopus Cut5 directly mediates ATR-dependent activation of Chk1.2006

    • 著者名/発表者名
      Hashimoto, Y.
    • 雑誌名

      Genes to Cell 11

      ページ: 993-1007

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] Reconstitution of Saccharomyces cerevisiae prereplicative complex assembly in vitro.2006

    • 著者名/発表者名
      Kawasaki, Y.
    • 雑誌名

      Genes to Cell 11

      ページ: 745-756

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] Historical view of DNA replication studies, with special reference to Japan.2006

    • 著者名/発表者名
      Sugino, A.
    • 雑誌名

      IUBMB Life 58

      ページ: 323-327

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] DNA polymerases, α, δ, and ε localise and function together at replication forks in Saccharomyces cereviiae.2005

    • 著者名/発表者名
      Hiraga, S.
    • 雑誌名

      Geens to Cells 10(4)

      ページ: 297-309

    • 関連する報告書
      2005 実績報告書
  • [雑誌論文] Assembly of additional heterochromatin distinct from centromere-kinetochore chromatin is required for de novo formation of human artificial chromosome.2005

    • 著者名/発表者名
      Nakashima, H.
    • 雑誌名

      Journal of Cell Science 118(24)

      ページ: 5885-5898

    • 関連する報告書
      2005 実績報告書
  • [雑誌論文] DNA polymerises, α,δ, and a localise and function to gether at replication forks in Saccharomyces cerevisiae.2005

    • 著者名/発表者名
      Hiraga, S.
    • 雑誌名

      Geens to Cells 10(4)(印刷中)

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Distinct roles of DNA polymerises delta and epsilon at the replication fork in Xenopus egg extracts.2004

    • 著者名/発表者名
      Fukui, T.
    • 雑誌名

      Genes to Cells 9(2)

      ページ: 179-191

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] L-Homoserylaminoethanol, a novel dipeptide alcohol inhibitor of eukaryotic DNA polymerase a from a plant cultured cells, Nicotina tabacum L.2004

    • 著者名/発表者名
      Kuriyama, I.
    • 雑誌名

      Biooganic & medicinal Chemistry 12

      ページ: 957-962

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [図書] Encyclopedia of Biological Chemistry2004

    • 著者名/発表者名
      Kawasaki, Y.
    • 総ページ数
      4
    • 出版者
      Elsevier, Oxford
    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [文献書誌] Leem, S-H.: "The possible mechanism of action of ciclopirox olamine in the yeast Saccharomyces crerevisiae"Mol.Cells. 15・1. 55-61 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Araki, Y.: "Budding yeast mcm10/dna43 mutant requires a novel repair pathway for viability"Genes to Cells. 8・5. 465-480 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Takayama, Y.: "GINS, a novel multiprotein complex required for chromosomal DNA replication in budding yeast"Genes & Development. 17・9. 1153-1165 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Tsubota, T.: "Double-stranded DNA binding properties of Saccharomyces cerevisiae DNA polymerase ε and of the Dpb3p-Dpb4p subassembly"Genes to Cells. 8・11. 873-888 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Hashimoto, K.: "Fidelity of DNA Polymerase δ Holoenzyme from Saccharomyces cerevisiae : The Sliding Clamp Proliferating Cell Nuclear Antigen Decreases Its Fidelity"Biochemistry. 42・48. 14207-14213 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Furukohri, A.: "Identification and Characterization of a Xenopus Homolog of Dbf4, a Regulatory Subunit of the Cdc7 Protein Kinase Required for the Initiation of DNA Replication"J.Biochem.. 134・3. 447-457 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書

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公開日: 2003-04-01   更新日: 2016-04-21  

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