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PASドメインをもつ転写因子間相互作用の細胞内リアルタイム観測

研究課題

研究課題/領域番号 15207010
研究種目

基盤研究(A)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 機能生物化学
研究機関東北大学

研究代表者

十川 和博  東北大学, 大学院生命科学研究科, 教授 (80175421)

研究分担者 福村 裕史  東北大学, 大学院理学研究科, 教授 (50208980)
安元 研一  東北大学, 大学院生命科学研究科, 助教授 (90241629)
菊池 康夫  東北大学, 大学院生命科学研究科, 助教授 (10004467)
高崎 親久  東北大学, 大学院生命科学研究科, 助手 (10004491)
研究期間 (年度) 2003 – 2005
研究課題ステータス 完了 (2005年度)
配分額 *注記
45,500千円 (直接経費: 35,000千円、間接経費: 10,500千円)
2005年度: 6,760千円 (直接経費: 5,200千円、間接経費: 1,560千円)
2004年度: 6,760千円 (直接経費: 5,200千円、間接経費: 1,560千円)
2003年度: 31,980千円 (直接経費: 24,600千円、間接経費: 7,380千円)
キーワードFRET / FLIM / 生細胞 / タンパク間相互作用 / VBC複合体 / 転写因子 / Elongin / von Hippel-Linda / in vivo計測 / FRIM-FRET / CFP / YFP / Living cell / protein-protein interaction / transcription factor / FRET-FLIM / Transcription factor
研究概要

半導体パルスレーザーを光源に,シングルフォトン計数器(TSCSPC)を検出器にもつFLIM(Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy)顕微鏡装置を作成した。この顕微鏡を使って,いくつかのタンパク間相互作用をFRET(Fluorescence Resonance Energy Transfer)により生細胞でイメージングした。まず,GAPDHテトラマーを形成するモノマー間のFRETを計測した。FRETデータを詳細に解析した結果,GAPDHテトラマーの生細胞内での生合成は,モノマーがおそらく翻訳後,ランダムに結合することによっておきることが推定できた。GAPDHとPGKの酵素間複合体を生細胞で直接観察したほか,GAPDHのコンフォメーションがPGKにより,PGKのコンフォメーションがGAPDHにより変化することを,FRET-FLIMにより観察した。低酸素ストレスに関与するVBC(pVHL-Elongin B-Elongin C)複合体をFRET-FLIMで観察し,elongin Bとelongin Cがまず結合し,elongin Cのコンフォメーション変化が誘起され,pVHLの結合が可能になることが推定できた。転写因子LBP-1タンパク質のなかでLBP-1aとLBP-1cが細胞質でダイマーを形成すること,LBP-1bが核でダイマーを形成することを,FRET-FLIMで観察した。また,Arntのダイマー形成がPMLボディー上でのみ起き,核質では起きないことをFRET-FLIMで観察した。

報告書

(4件)
  • 2005 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2004 実績報告書
  • 2003 実績報告書
  • 研究成果

    (10件)

すべて 2006 2005 2004 その他

すべて 雑誌論文 (7件) 文献書誌 (3件)

  • [雑誌論文] Application of time - and space - resolved fluorescence spectroscopy to the distribution of guest species into micrometer - sized crystals.2006

    • 著者名/発表者名
      S.Hashimoto
    • 雑誌名

      Phys.Chem.Chem.Phys 8

      ページ: 1451-1458

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2005 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Application of time- and space-resolved fluoresce n c-c spectroscopy to the distribution of guest species into micrometer-sized crystals2006

    • 著者名/発表者名
      S.Hashimoto, K.Uehara, K.Sogawa, M.Takada, H.Fukumura
    • 雑誌名

      Phys.Chem.Chem.Phys. 8

      ページ: 1451-1458

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2005 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Application of time-and space-resolved fluorescence spectroscopy to the distribution of guest species into micrometer-sized zeolite crystals2006

    • 著者名/発表者名
      Shuichi Hashimoto
    • 雑誌名

      Phys.Chem.Chem.Phys. (in press)

    • 関連する報告書
      2005 実績報告書
  • [雑誌論文] Heterodimerization with LBP-1b is necessary for nuclear localization of LBP-1a and LBP-1c2005

    • 著者名/発表者名
      Fuyuhiko Sato
    • 雑誌名

      Genes to cells 10

      ページ: 861-870

    • 関連する報告書
      2005 実績報告書
  • [雑誌論文] In vitro photodynamic effects of phthalocyaninatosilicon covalently linked to 2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy radicals on cancer cells2005

    • 著者名/発表者名
      Kazuyuki Ishii
    • 雑誌名

      Free Radical Biology & Medicine 38

      ページ: 920-927

    • 関連する報告書
      2005 実績報告書
  • [雑誌論文] A novel induction mechanism of the rat CYP1A2 gene mediated by Ah receptor-Arnt heterodimer2004

    • 著者名/発表者名
      Kazuhiro Sogawa
    • 雑誌名

      Bio chem.Biophys.Res.Commun. 318

      ページ: 746-755

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Altered DNA binding specificity of Arnt by selection of partner bHLH-PAS proteins2004

    • 著者名/発表者名
      Koshi Kinosita
    • 雑誌名

      Nuc.Acids.Res. 32

      ページ: 3169-3179

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [文献書誌] D.Mori: "Gene structure and promoter analysis of the rat BTEB2 gene"Gene. 304. 163-170 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Y.Kikuchi: "Heterodimers of bHLH-PAS Protein Fragments Derived from AhR, AhRR, and Arnt Prepared by Co-Expression in Escherichia coli : Characterization of Their DNA Binding Activity and Preparation of a DNA Complex"J.Biochem.. 134. 83-90 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] M.Morita: "HLF/HIF-2α is a key factor in retinopathy of prematurity in association with erythropoietin"EMBO J.. 22. 1134-1146 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書

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公開日: 2003-04-01   更新日: 2016-04-21  

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