| 研究課題/領域番号 |
15310157
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
生物分子科学
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| 研究機関 | 独立行政法人産業技術総合研究所 |
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研究代表者 |
小松 康雄 (2004) 独立行政法人産業技術総合研究所, ゲノムファクトリー研究部門, グループ長 (30271670)
大塚 榮子 (2003) 独立行政法人産業技術総合研究所, フェロー研究員 (80028836)
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| 研究分担者 |
小島 直 独立行政法人産業技術総合研究所, ゲノムファクトリー研究部門, 研究員 (30356985)
上出 利光 北海道大学, 遺伝子病制御研究所・分子免疫部門, 教授 (00160185)
今 重之 北海道大学, 遺伝子病制御研究所・マトリックスメディスン研究部門, 助教授 (90344499)
小松 康雄 独立行政法人産業技術総合研究所, 生物機能工学研究部門, 主任研究員 (30271670)
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| 研究期間 (年度) |
2003 – 2004
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| 研究課題ステータス |
完了 (2004年度)
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| 配分額 *注記 |
15,900千円 (直接経費: 15,900千円)
2004年度: 6,100千円 (直接経費: 6,100千円)
2003年度: 9,800千円 (直接経費: 9,800千円)
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| キーワード | オステオポンチン / OPN / 転移 / concanavalin A / siRNA / 肝炎 / RNA / オリゴヌクレオチド / Concanavalin A / 癌転移 / RNAi / 炎症疾患 / リン酸化糖タンパク質 |
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| 研究概要 |
オステオポンチン(OPN)は、細胞外マトリックスとしての細胞接着や細胞遊走能のみならず、T細胞活性化やTh1/Th2 polarization制御等のサイトカイン様機能をも有し、欠損マウスや中和抗体を用いた解析から、OPN機能抑制により癌転移およびリウマチや多発性硬化症等の慢性炎症性疾患に対する治療効果を得られることが示されている。そこで、近年、新規分子特異的ノックダウン法として注目されてきているsiRNA法を用いて、OPNノックダウンによる疾患治療効果を検討した。OPN siRNAはそれぞれ数種合成し、RNAi効果はOPN発現細胞株を用いて検討した。疾患モデルは癌転移と肝炎モデルを採用した。癌転移モデルは、マトリゲルチャンバーを用いた癌転移in vitro assayにて行い、siRNA導入癌細胞にて浸潤能の低下を確認することができた。肝炎モデルは、Concanavalin A(ConA)の静脈内投与により作製するConA肝炎モデルを使用し、OPN siRNAをConA投与の24時間前、16時間前、同時の計3回静脈内投与による治療効果を検討した。肝炎悪性度は血清中ALT値、組織学的検討により評価を行った結果、OPN発現抑制と肝炎治療効果の相関を認めることができ、OPN siRNAの遺伝子治療薬としての可能性を示すことができた。このとき、用いるsiRNAの細胞内における作用の持続性を目指し、siRNAに化学修飾を導入した新規siRNAも構築し、その抑制効果の評価を行った。その結果、多くの化学修飾siRNAは作用効果の向上が確認できなかったが、ある修飾体については、未修飾siRNAと匹敵する作用効果が見られた。さらにsiRNA処理することによる網羅的な遺伝子発現のプロファイル変化をDNAチップによって調べた。その結果、幾つかの遺伝子がsiRNA処理に呼応して変動していることが確認できた。
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