造血器腫瘍に対する新たな免疫遺伝子治療の開発

• 研究課題/領域番号: 15390301
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 血液内科学
• 研究機関: 愛媛大学
• 研究代表者: 安川 正貴 愛媛大学, 医学部, 助教授 (60127917)
• 研究分担者: 薬師神 芳洋 愛媛大学, 医学部, 助手 (30294797) ; 内田 直之 愛媛大学, 医学部附属病院, 助手 (80359926)
• 研究期間 (年度): 2003 – 2004
• 研究課題ステータス: 完了 (2004年度)
• 配分額: 14,700千円 (直接経費: 14,700千円); 2004年度: 6,000千円 (直接経費: 6,000千円); 2003年度: 8,700千円 (直接経費: 8,700千円)
• キーワード: 造血器腫瘍 / 細胞傷害性T細胞 / WT1 / がんワクチン / 免疫不全マウス / T細胞レセプター / 白血病 / 免疫療法 / パーフォリン / 骨髄腫

研究概要

造血器腫瘍に対する新たな免疫遺伝子療法の開発を目的として研究を遂行し、以下の成果を得た。1)骨髄腫細胞はリンパ腫細胞と比べて、WT1特異的細胞傷害性T細胞(CTL)によるパーフォリン依存性細胞傷害感受性が高いことが明らかとなった。2)CD4陽性およびCD8陽性CTLにおけるパーフォリン発現と細胞周期との関連を調べたところ、CD8陽性CTLでは細胞周期に関わらず恒常的に発現が認められたが、CD4陽性CTLではG2/M期に転写が促進することが明らかとなった。この違いは、STAT5のパーフォリンプロモーターへの結合の差によることが判明した。3)腫瘍細胞に強い細胞傷害性を示すWT1特異的CD8陽性CTLクローンからT細胞レセプターα鎖およびβ鎖遺伝子をクローニングし、正常CD4陽性およびCD8陽性T細胞に遺伝子導入することによって、白血病細胞に対してHLAクラスI拘束性に細胞傷害性が獲得されることが明らかとなった。ただし、CD4陽性T細胞による機能発現には標的細胞上のHLAクラスIIとCD4分子との結合が必要であることも明らかとなった。4)HLA-DP5拘束性CD4陽性T細胞が認識する新たなWT1エピトープを同定した。このペプチド特異的CD4陽性T細胞はWT1特異的に白血病細胞を殺傷した。5)これまでの基礎研究成果をもとに、WT1とhTERT由来ペプチドを用いたがんペプチドワクチンの第I相臨床試験を遂行している。グレード2以上の有害事象は認められず、一部の症例に臨床効果が得られている。6)新たな免疫不全マウスにヒト造血幹細胞を移植することによってヒト免疫系を構築したマウスを作製した。今後、ヒトにおけるワクチン開発に有用であると思われる。

研究成果

• [雑誌論文] Generation of human tumor-specific, HLA class I-restricted Th1 and Tc1 cells by cell engineering with tumor peptide-specific T cell receptor genes (2005)
  • 著者名/発表者名: Tsuji T, et al.
  • 雑誌名: Blood (in press)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Genetic subtypes of familial hemophagocytic lymphohistiocytosis, correlations with clinical features and cytotoxic T lymphocyte/natural killer cell functions (2005)
  • 著者名/発表者名: Ishii e, et al.
  • 雑誌名: Blood (in press)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Genetic subtypes of familial hemophagocytic lymphohistiocytosis : correlations with clinical features and cytotoxic T lymphocyte/natural killer cell functions (2005)
  • 著者名/発表者名: Ishii e, et al.
  • 雑誌名: Blood (in press)
• [雑誌論文] Human cord blood-and bone marrow-derived CD34^+ cells regenerate gastrointestinal epithelial cells (2004)
  • 著者名/発表者名: Ishikawa F, et al.
  • 雑誌名: FASEB J. 18 ページ: 1958-1960
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Identification of novel MUNC13-4 mutations in familial hemophagocytic lymphohistiocytosis and functional analysis of MUNC13-4-deficient cytotoxic T lymphocytes (2004)
  • 著者名/発表者名: Yamamoto K, et al.
  • 雑誌名: J.Med.Genet. 41 ページ: 763-767
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Myeloma cells are highly sensitive to granule exocytosis pathway mediated by WT1-specific cytotoxic T lymphocytes (2004)
  • 著者名/発表者名: Azuma T, et al.
  • 雑誌名: Clin,.Cancer Res. 10 ページ: 7402-7412
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Human cord blood- and bone marrow-derived CD34^+ cells regenerate gastrointestinal epithelial cells. (2004)
  • 著者名/発表者名: Ishikawa, F., Yasukawa, M., Yoshida, S., Shimoda, K., Shimoda, S., Nakamura, K., Nagatoshi, Y., Kanemaru, T., Kawano, N., Nagafuji, K., Miyamoto, T., Fukuda, T., Okamura, J., Shultz, L.D., Harada, M.
  • 雑誌名: FASEB J. 18 ページ: 1958-1960
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Identification of novel MUNC13-4 mutations in familial hemophagocytic lymphohistiocytosis and functional analysis of MUNC 13-4-deficient cytotoxic T lymphocytes. (2004)
  • 著者名/発表者名: Yamamoto, K., Ishii, E., Sako, M., Ohga, S., Furuno, K., Suzuki, N., Ueda, I., Imayoshi, M., Yamamoto, S., Morimoto, A., Takada, H., Hara, T., Imashuku, S., Sasazuki, T., Yasukawa, M.
  • 雑誌名: J.Med.Genet. 41 ページ: 763-767
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Myeloma cells are highly sensitive to granule exocytosis pathway mediated by WT1-specific cytotoxic T lymphocytes. (2004)
  • 著者名/発表者名: Azuma, T., Otsuki, T., Kuzushima, K., Froelich, C., Fujita, S., Yasukawa, M.
  • 雑誌名: Clin.Cancer Res. 10 ページ: 7402-7412
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Human cord blood- and bone marrow-derived CD34^+ cells regenerate gastrointestinal epithelial cells (2004)
  • 著者名/発表者名: Ishikawa F, et al.
  • 雑誌名: FASEB J. 18 ページ: 1958-1960
• [雑誌論文] Myeloma cells are highly sensitive to granule exocytosis pathway mediated by WT1-specific cytotoxic T lymphocytes (2004)
  • 著者名/発表者名: Azuma T, et al.
  • 雑誌名: Clin.Cancer Res. 10 ページ: 7402-7412
• [雑誌論文] Essential roles of perforin in antigen-specific cytotoxicity mediated by human CD4^+ T lymphocytes : analysis using the combination of hereditary perforin-deficient effector cells and Fas-deficient target cells (2003)
  • 著者名/発表者名: Yanai F, et al.
  • 雑誌名: J.Immunol. 170 ページ: 2205-2213
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Essential roles of perforin in antigen-specific cytotoxicity mediated by human CD4^+ T lymphocytes : analysis using the combination of hereditary perforin-deficient effector cells and Fas-deficient target cells. (2003)
  • 著者名/発表者名: Yanai, F., Ishii, E., Kojima, K., Hasegawa, A., Azuma, T., Hirose, S., Suga, N., Mitsudome, A., Zaitsu, M., Ishida, Y., Shirakata, Y., Sayama, K., Hashimoto, K., Yasukawa, M.
  • 雑誌名: J.Immunol. 170 ページ: 2205-2213
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Generation of human tumor-specific, HLA class I-restricted Th1 and Tc1 cells by cell engineering with tumor peptide-specific T cell receptor genes.
  • 著者名/発表者名: Tsuji, T., Yasukawa, M., Matsuzaki, J., Ohkuri, T., Chamoto, K., Azuma, T., Niiya, H., Miyoshi, H., Takeshima, T., Ikeda, H., Nishimura, T.
  • 雑誌名: Blood (in press)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Genetic subtypes of familial hemophagocytic lymphohistiocytosis : correlations with clinical features and cytotoxic T lymphocyte/natural killer cell functions.
  • 著者名/発表者名: Ishii, E., Ueda, I., Shirakawa, R., Yamamoto, K., Horiuchi, H., Ohga, S., Furuno, K., Morimoto, A., Imayoshi, M., Ogata, Y., Sako, M., Koike, K., Sakata, A., Takada, H., Hara, T., Imashuku, S., Sasazuki T., Yasukawa, M.
  • 雑誌名: Blood (in press)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Yamanouchi, J., Yasukawa, M., et al.: "Identification of an epitope on glycoprotein IIb-IIIa that is recognized by HLA-DRB1*0405-restricted CD4^+ T cells from a patient with ITP"J.Thromb.Haemostasis. (In press). (2004)
• [文献書誌] Yanai, F., Yasukawa, M., et al.: "Essential roles of perforin in antigen-specific cytotoxicity mediated by human CD4^+ T lymphocytes : analysis using the combination of hereditary perforin-deficient effector cells and Fas-deficient target cells"J.Immunol.. 170. 2205-2213 (2003)
• [文献書誌] Oka, Y., Yasukawa, M., et al.: "Wilms tumor gene peptide-based immunotherapy for patients with overt leukemia from myelodysplastic syndrome (MDS) or MDS with myelofibrosis"Int J Hematol.. 78. 56-61 (2003)
• [文献書誌] Takahashi, T., Yasukawa, M., et al.: "Valpha24+ natural killer T-cell responses against T-acute lymphoblastic leukaemia cells : implications for immunotherapy"Br.J.Haematol.. 122. 231-239 (2003)
• [文献書誌] Hamada, M., Yasukawa, M., et al.: "Aurora2/BTAK/STK15 is involved in cell-cycle checkpoint and cell survival of aggressive non-Hodgkin's lymphoma"Br.J.Haematol.. 121. 439-447 (2003)