| 研究課題/領域番号 |
15500324
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
医用生体工学・生体材料学
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| 研究機関 | 大妻女子大学 |
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研究代表者 |
小山 義之 大妻女子大学, 家政学部, 教授 (00162090)
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| 研究分担者 |
伊藤 智子 大妻女子大学, 家政学部, 助手
柳衛 宏宣 東京大学, 先端科学技術研究センター, 特任助教授 (30212278)
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| 研究期間 (年度) |
2003 – 2004
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| 研究課題ステータス |
完了 (2004年度)
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| 配分額 *注記 |
3,200千円 (直接経費: 3,200千円)
2004年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
2003年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
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| キーワード | 遺伝子治療 / 三元複合体 / ポリアニオン / 転写 / HMGタンパク / PEG / ヒアルロン酸 / ターゲティング / ポリイオンコンプレックス |
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| 研究概要 |
遺伝子治療において、DNA/ポリカチオン複合体が合成ベクターとして有用視され研究されている。しかし、これらは通常プラスに帯電しているため、血清タンパクによる凝集などが問題となっている。我々はカルボキシル側鎖を持つPEG誘導体(PEG-C)でDNA/ポリカチオン複合体をコートすることでこれらの相互作用が低減されることを見出し、報告してきた。本研究では、PEG-Cの側鎖に糖鎖をリガンドとして導入することにより標的細胞への特異的な遺伝子導入を試みた。またPEG-C、およびその両性イオン誘導体の転写促進効果についても検討した。
糖側鎖を持つアニオン性PEG誘導体、Sugar-PEG-CはDNA/ポリカチオン複合体の表面をコートし、三元複合体を形成した。これらはアルブミン存在下でも凝集せず、アルブミンに対する保護効果を示した。
肝由来のHepG2細胞はPlasmid/ポリカチオン/Galactose-PEG-C三元複合体により高い遺伝子発現を見せた。一方、NIH3T3細胞では発現はほとんど見られなかった。これらのことから、Plasmid/ポリカチオン/Sugar-PEG-C三元複合体は細胞の糖鎖認識機構によって取り込まれたものと考えられる。
DNA/ポリカチオン/PEG-C三元複合体はDNA/ポリカチオン二元複合体に比べて高い転写活性を示した。これは、PEG-Cがコンプレックスを緩和し、RNAポリメラーゼがアクセスしやすくなったためと考えられる。天然の転写活性化因子、HMGに似たモデル高分子として、アミノ基とカルボキシル基の両方を側鎖に導入した両性イオン型誘導体、PEG-ACを合成し、その転写効率への影響を調べてみたところ、PEG-Cよりもさらに高い転写活性化効率を示した。これらの水溶性両性イオン型PEG誘導体は、人工HMGとしての応用が期待される。
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