ピロプラズマ原虫のマダニ体細胞への付着および侵入機構の解明

• 研究課題/領域番号: 15580265
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 基礎獣医学・基礎畜産学
• 研究機関: 北里大学
• 研究代表者: 小山田 隆 北里大学, 獣医畜産学部, 教授 (80050665)
• 研究分担者: 筏井 宏実 北里大学, 獣医畜産学部, 講師 (80327460) ; 吉岡 一機 北里大学, 獣医畜産学部, 講師 (30327457) ; 松鵜 彩 北里大学, 獣医畜産学部, 助手 (40348595)
• 研究期間 (年度): 2003 – 2005
• 研究課題ステータス: 完了 (2005年度)
• 配分額: 3,800千円 (直接経費: 3,800千円); 2005年度: 500千円 (直接経費: 500千円); 2004年度: 500千円 (直接経費: 500千円); 2003年度: 2,800千円 (直接経費: 2,800千円)
• キーワード: ピロプラズマ原虫 / Haemaphysalis longicornis / Babesia equi / Babesia caballi / Babesia gibsoni / 付着 / 侵入 / マダニ / モノクローナル抗体 / 伝播 / 付着および侵入機構 / Lactoferrin / ピロプラズマ原虫感染症 / 付着・侵入機構 / 遺伝子 / 組換え蛋白質 / Loop-mediated Isothermal Amplification Method / 迅速高感度簡易診断法

研究概要

本研究はピロプラズマ原虫感染症に対して本原虫の生活史を総合的に鑑み、制圧に最も重要と考えられるマダニ増殖ステージにおける付着および侵入機構の解明を最終目的として行われた。以下に研究成果の概要を述べる。
1.ピロプラズマ原虫生活史において重要な増殖の場であるマダニ体内における動態観察のため、ピロプラズマ原虫感染マダニ作出をインジェクション法で行い、原虫の動態観察を行った。本感染方法は経時的にマダニ体内の原虫観察を可能とし、実験室内で飼育が容易なHaemaphysalis longicornisがBabesia caballiおよびBabesia equiの伝播者になりうる事、加えてBabesia equiが一般的に知られていた経発育伝播ばかりでなく介卵伝播によっても伝播する事を実験的に証明した。
2.細胞侵入過程における高発現蛋白質に対する特異的モノクローナル抗体作製をおこない、その蛋白質をコードする原虫新規遺伝子配列を決定した。それらは、宿主免疫回避機構として重要である表面蛋白質であり、赤血球接着因子としても働くP30およびP32、また、それらの活性化さらには抗原虫薬の標的蛋白質として重要である事が考えられるPDIおよびBiPであった。
3.Real time-PCR法を用いる事によりピロプラズマ原虫の高感度定量法を確立した。加えて、迅速で高感度な遺伝子診断法を確立し、我が国におけるイヌのピロプラズマ症の疫学調査を行った。
4.Apo-LactoferrinはB.equiの増殖に関与せずB.caballiの増殖を強く抑制する事を明らかにした。

研究成果

• [雑誌論文] Cloning of the Babesia gibsoni cytochrome b gene and isolation of three single nucleotide polymorphisims trom parasites present after atovaquone treatment. (2006)
  • 著者名/発表者名: Matsuu, A., Miyamoto, K.(その他3名)
  • 雑誌名: American Journal of Tropical Medicine and Hygine 74・4(In press)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Inhibitory effect of lactoferrin on in vitro grouth of Babesia caballi. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ikadai, H., Tanaka, T.(その他7名)
  • 雑誌名: Amercan Journao of tropical Medicine and Hygine 73・4 ページ: 710-712
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Devekioment of a SYBR Green real-time polymerase chain riaction assay for quantitative detection of Babesia gibsoni(Asian genotype) DNA. (2005)
  • 著者名/発表者名: Matsuu, A., Ono, S.(その他6名)
  • 雑誌名: Journal of Veterinry Diagnostic Investigation 17・6 ページ: 569-573
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Molecular characterization of a putative protein disulfide isomerase from Babesa caballi. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ikadai, H., Tsukada, R.(その他6名)
  • 雑誌名: Parasitology 131・Pt6 ページ: 775-782
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Molecular cloning and characterization of a putative binding protein of Babesia caballi. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ikadai, H., Takamatsu, Y.(その他5名)
  • 雑誌名: American journal of Tropocal Medicine and Hygine 73・6 ページ: 1135-1138
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Inhibitory effect of lactoferrin on in vitro growth of Babesia cuballi. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ikadai, H., Tanaka, T., Shibahara, N., Tanaka, H., Matsuu, A., Kudo, N., Shimazaki, K., Igarashi, I., Oyamada, T.
  • 雑誌名: Am.J.Trop.Med.Hyg. 73 ページ: 710-712
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Development of a SYBR Green real-time polymerase chain reaction assay for quantitative detection of Babesia gibsoni (Asian genotype) DNA. (2005)
  • 著者名/発表者名: Matsuu, A., Ono, S., Ikadai, H., Uchide, T., Imamura, S., Onuma, M., Okano, S., Higuchi, S.
  • 雑誌名: J.Vet.Diagn.Invest. 17 ページ: 569-573
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Molecular characterization of a putative protein disulfide isomerase from Babesia caballi. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ikadai, H., Tsukada, R., Sasaki, M., Takashiro, R., Yokoyama, N., Kudo, N., Igarashi, I., Oyamada, T.
  • 雑誌名: Parasitology 131 ページ: 775-782
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Molecular cloning and characterization of a putative binding protein of Babesia caballi. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ikadai, H., Takamatsu, Y., Takashiro, R., Segawa, A., Kudo, N., Igarashi, I., Oyamada, T.
  • 雑誌名: Am.J.Trop.Med.Hyg. 73 ページ: 1135-1138
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Inhibitory effect of lactoferrin on in vitro growth of Babesia caballi. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ikadai, H(その他8名)
  • 雑誌名: Am.J.Trop.Med.Hyg. 73 ページ: 710-712
• [雑誌論文] Development of a SYBR Green real-time polymerase chain reaction assay for quantitative detection of Babesia gibsoni (Asian genotype) DNA. (2005)
  • 著者名/発表者名: Matsuu, A(その他7名)
  • 雑誌名: J.Vet.Diagn.Invest. 17 ページ: 560-564
• [雑誌論文] Molecular characterization of a putative protein disulfide isomerase from Babesia caballi. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ikadai, H(その他7名)
  • 雑誌名: Parasitology 131 ページ: 775-782
• [雑誌論文] Molecular cloning and characterization of a putative binding protein of Babesia caballi. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ikadai, H(その他6名)
  • 雑誌名: Am.J.Trop.Med.Hyg. 73 ページ: 1135-1138
• [雑誌論文] Molecular evidence of infections with Babesia gibsoni parasites in Japan and evaluation of the diagnostic potential of a loop-mediated isothermal amplification method. (2004)
  • 著者名/発表者名: Ikadai, H., Tanak, H.(その他8名)
  • 雑誌名: Journal of Clinical Microbiology 42・6 ページ: 2465-2469
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Incidence of canine Babesia gibsoni infecton and subclinical infection among Tosa dog in Aomori Prefecture,Japan (2004)
  • 著者名/発表者名: Matsuu, A., Kawabe, A.(その他4名)
  • 雑誌名: Journal of Vererinary Medical Science 66・8 ページ: 893-897
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Efficacy of atovaquone against Babesia gibsoni in vivo and in vitro. (2004)
  • 著者名/発表者名: Matsuu, A., Koshida, Y.(その他6名)
  • 雑誌名: Veterinary Parasitology 124・1-2 ページ: 9-18
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Babesia caballi : analysis of chromosomes separated by pulse field get electrophoresis. (2004)
  • 著者名/発表者名: Ikadai, H., Kudo, N.(その他2名)
  • 雑誌名: Journal of protozoology Research 14 ページ: 32-36
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Molecular evidence of infections with Babesia gibsoni parasites in Japan and evaluation of the diagnostic potential of a loop-mediated isothermal amplification method. (2004)
  • 著者名/発表者名: Ikadai, H., Tanaka, H., Shibahara, N., Matsuu, A., Uechi, M., Itoh, N., Oshiro, S., Kudo, N., Igarashi, I., Oyamada, T.
  • 雑誌名: J.Clin.Microbiol. 42 ページ: 2465-2469
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Incidence of canine Babesia gibsoni infection and subclinical infection among Tosa dog in Aomori Prefecture, Japan. (2004)
  • 著者名/発表者名: Matsuu, A., Kawabe, A., Koshida, Y., Ikadai, H., Okano, S., Higuchi, S.
  • 雑誌名: J.Vet.Med.Sci. 66 ページ: 893-897
  • NAID: 110003886481
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Efficacy of atovaquone against Babesia gibsoni in vivo and in vitro. (2004)
  • 著者名/発表者名: Matsuu, A., Koshida, Y., Kawahara, M., Inoue, K., Ikadai, H., Hikasa, Y., Okano, S., Higuchi, S.
  • 雑誌名: Vet.Parasitol. 124 ページ: 9-18
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Babesia caballi : analysis of chromosomes separated by pulse field gel electrophoresis. (2004)
  • 著者名/発表者名: Ikadai, H., Kudo, N., Oyamada, T., Igarashi, I.
  • 雑誌名: J.Protozool.Res. 14 ページ: 32-36
  • NAID: 130007908530
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Molecular evidence of Babesia gibsoni parasite infections in Japan and evaluation of diagnostic potential in Loop-mediated isothermal amplification method. (2004)
  • 著者名/発表者名: Ikadai, H (その他9名)
  • 雑誌名: Journal of Clinical Microbiology 42・6 ページ: 2465-2469
• [雑誌論文] Incidence of canine Babesia gibsoni infection and subclinical infection among Tosa dog in Aomori Prefecture, Japan. (2004)
  • 著者名/発表者名: Matsuu, A (その他5名)
  • 雑誌名: Journal of Veterinary Medical Science 66・8 ページ: 893-897
  • NAID: 110003886481
• [雑誌論文] Efficacy of atovaquone against Babesia gibsoni in vivo and in vitro. (2004)
  • 著者名/発表者名: Matsuu, A (その他7名)
  • 雑誌名: Veterinary Parasitology 124・1-2 ページ: 9-18
• [雑誌論文] Cloning of the Babesia gibsoni cytochrome b gene and isolation of three single nucleotide polymorphisms from parasites present after atovaquone treatment.
  • 著者名/発表者名: Matsuu, A., Miyamoto, K., Ikadai, H., Okano, S., Higuchi, S.
  • 雑誌名: Am.J.Trop.Med.Hyg. (in press)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Babesia caballi : analysis of chromosomes separated by pulse field gel electrophoresis.
  • 著者名/発表者名: Ikadai, H (その他3名)
  • 雑誌名: Journal of Protozoology Research (in press)(掲載予定)
  • NAID: 130007908530
• [雑誌論文] Inhibitory effect of lactoferrin on the in vitro growth of Babesia caballi protozoan.
  • 著者名/発表者名: Ikadai, H (その他8名)
  • 雑誌名: American Journal of Tropical Medicine and Hygiene (in press)(掲載予定)
• [文献書誌] Ikadai, H., Tanaka H., Shibahara, N., Matsuu, A., Uechi, M., Itoh, N., Oshiro, S., Kudo, N., Igarashi, I., Oyamada, T.: "Molecular Evidence of Babesia gibsoni Parasite Infections in Japan and Evaluation of the Diagnostic Potential of a Loop-mediated Isothermal Amplification Method"Journal of Clinical Microbiology. (accepted)(掲載予定).