| 研究課題/領域番号 |
15590581
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
法医学
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| 研究機関 | 宮崎大学 (2004)
宮崎大学(医学部) (2003) |
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研究代表者 |
湯川 修弘 宮崎大学, 医学部, 教授 (30240154)
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| 研究分担者 |
松田 洋和 宮崎大学, 医学部, 助手 (10363582)
瀬尾 泰久 宮崎大学, 医学部, 助教授 (80187830)
柿崎 英二 宮崎大学, 医学部, 助手 (70284833)
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| 研究期間 (年度) |
2003 – 2004
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| 研究課題ステータス |
完了 (2004年度)
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| 配分額 *注記 |
3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
2004年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
2003年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
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| キーワード | 法医学 / 物体検査 / 人獣鑑別 / DNA検査 / ミトコンドリアDNA / チトクロムb / PCR法 |
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| 研究概要 |
本研究はヒト特異的mtDNA塩基配列に基づいたprimerを設計し、従来から法医学分野で個人識別に用いられているmtDNA高変異領域(D-loop)の各種primerとを組み合わせたmultiplex-PCR法を行うことで、検査試料の人獣鑑別と固人識別を同時に実施しようとするものである。先ず、コンピュータデータベース上で、ヒト及び霊長類のmtDNAの全長を比較して、ヒトに特異的なmtDNA配列を検索し、数種類のprimerを設定した。そのうち、NADH dehydrogenaseサブユニットのND4領域に設定したprimerにおいて、ヒトDNAのみを増幅する高い特異性を認めた。そこでこのNDA primerとD-loop領域の4組のprimer (HV1: L15997-H16236,L16159-H16401,HV2: L29-H285,L172-H408)とをそれぞれ組み合わせたmultiplex-PCR増幅を行った。その結果、ヒト試料では何れのprimerの組み合わせであっても、電気泳動上、明瞭な2本のバンドが検出され、全く増幅産物を認めない、或いは非特異的な増幅産物が検出される動物試料とは、明確に鑑別することが可能であった。またヒトの血液・毛髪・爪のDNAを試料としたmultiplex-PCR増幅産物については、D-loop領域のダイレクトシーケンス解析が可能であった。続いて、開発したmultiplex-PCR法について、血痕や骨などの変性・陳旧化した試料への応用性について検討した。先ず、20年経過した血痕・及び毛髪から得たDNA(各10名)を用いて検討したところ、全例で目的断片の増幅が可能であった。同様に、13-25年保存してあった人骨(10例)から抽出したDNAを用いたmultiplex-PCR増幅においても、全例で検出可能であった。そこで同一人物から採取した血痕及び毛髪試料について、multiplex-PCR増幅で得られた増幅産物のダイレクトシーケンス解析を行った。その結果、本法によって得られた増幅産物からD-loop領域のシーケンス解析が可能であることが確認された。即ち、これまでのmtDNA D-loop領域のPCR増幅反応手順を何ら変えることなく、本法によって試料の人獣鑑別を同時に行うことが可能となった。これらの結果から、本法は変性試料のDNA検査法の一つとして法医学的に有用と考えられた。
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