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ヒト精液特異CD10-CD13酵素複合体の生理活性-特に培養細胞内レクチンおよびNOS産生への影響-

研究課題

研究課題/領域番号 15590583
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 法医学
研究機関福島県立医科大学

研究代表者

阿部 すみ子  福島県立医科大学, 医学部, 助手 (50136975)

研究期間 (年度) 2003 – 2004
研究課題ステータス 完了 (2004年度)
配分額 *注記
2,800千円 (直接経費: 2,800千円)
2004年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
2003年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
キーワード誘導型一酸化窒素合成酵素 / ペプチド抗体 / サンドイッチELISA / CD10-CD13酵素複合体 / ヒト精液
研究概要

本研究は我々が発見したγ-glutamyl transpeptidase活性を示すヒト精液特異ユビキチン化CD10-CD13酵素複合体(SEGAP)が細胞外のプロテアソーム非存在下でどのような生理活性を示すのかを解明することを目的とする。その中でSEGAPがヒト由来培養細胞において誘導型一酸化窒素合成酵素(iNOS)の発現を促すことが観察された。iNOSは炎症性に誘導され、産生されたNOは多彩な病態生理活性を発揮する。iNOSを直接検出するにはウェスタンブロット法や細胞免疫染色法が用いられてきたが手技が複雑であるため一般化されていない。そこで、iNOSの特異的配列に従って合成したペプチドおよびマウスiNOSに対する抗体を作製し、サンドイッチELISAによる定量的検出を試みた。
【方法】アフィニティークロマトグラフィーにより精製したペプチド抗体の一部をビオチン化し二次抗体とした。リコンビナントマウスiNOSを抗原とし、プロテインAカラムにより精製した抗マウスiNOSのIgG分画を一次抗体とした。リコンビナントマウスiNOSを標準としてELISAを行なった。
【結果】ラットの肝ホモジネートに標準iNOSを添加後に100,000xgで1時間遠心した上清を測定した結果、良好な回収率と0.1から2ngの範囲で直線性を示す検量線が得られた。Lipopolysaccharide(LPS)によりiNOSは強く誘導されることから、LPSを投与したラットの肝におけるiNOSの発現をRT-PCRによるmRNAの半定量とELISAにより観察した。その結果、iNOSmRNAが発現していないコントロール肝ではタンパク質1mgあたり0.6ng以下で、mRNA発現が観察されたLPS投与ラット肝では約1.4ngのiNOSタンパク質が定量されたことから、ELISAにより細胞・組織中のiNOS測定が可能と考えられた。
以上の結果を踏まえ、SEGAP処理により培養細胞内で誘導されるiNOSの遺伝子レベルでの発現を観察するとともに、サンドイッチELISAを用いてタンパク質レベルで定量を試みている。

報告書

(3件)
  • 2004 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2003 実績報告書
  • 研究成果

    (15件)

すべて 2004 2003 その他

すべて 雑誌論文 (13件) 文献書誌 (2件)

  • [雑誌論文] Induction of nerve growth factor mRNA in a rat dorsal root ganglion after application of a tourniquet.2004

    • 著者名/発表者名
      Abe S.et al.
    • 雑誌名

      Acta Neuropathologica 108

      ページ: 183-188

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] ペプチド抗体を用いたサンドイッチELISAによる誘導型一酸化窒素合成酵素の検出法2004

    • 著者名/発表者名
      阿部すみ子 他
    • 雑誌名

      日本法医学雑誌 58

      ページ: 53-53

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 実績報告書 2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] サンドイッチELISAによる誘導型NOS合成酵素の検出2004

    • 著者名/発表者名
      阿部すみ子 他
    • 雑誌名

      法医学の実際と研究 47

      ページ: 242-242

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 実績報告書 2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Induction of nerve growth factor mRNA in a rat dorsal root ganglion after application of a tourniquet2004

    • 著者名/発表者名
      Abe Sumiko, Mizusawa Ikubumi, Kanno Katsuyuki, Yabashi Atsuko, Suto Miwako, Kuraya Mikio, Honda Takashi, Hiraiwa Kouichi
    • 雑誌名

      Acta Neuropathologica 108

      ページ: 183-188

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Usefulness of a sandwich ELISA for detection of inducible nitric oxide synthase2004

    • 著者名/発表者名
      Abe Sumiko, Suto Miwako, Kato Naho, Hiraiwa Kouichi
    • 雑誌名

      Japanese Journal of Legal Medicine 58

      ページ: 53-53

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] A sandwich ELISA for inducible nitric oxide synthase2004

    • 著者名/発表者名
      Abe Sumiko, Suto Miwako, Hiraiwa Kouichi, Kuraya Mikio
    • 雑誌名

      Research and Practice in Forensic Medicine 47

      ページ: 242-242

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Induction of nerve growth factor mRNA in a rat dorsal root ganglion after application of a tourniquet.2004

    • 著者名/発表者名
      Abe S.et al.
    • 雑誌名

      Acta Neuropathol 108

      ページ: 183-188

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Nitric oxide synthase expressions in rat dorsal root ganglion after application of a hind limb tourniquet2003

    • 著者名/発表者名
      Abe S.et al.
    • 雑誌名

      NeuroReport 14(17)

      ページ: 2267-2270

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] IL-6 and iNOS expressions in a rat kidney after release of a tourniquet applied to a hind limb2003

    • 著者名/発表者名
      Hiraiwa K., Abe S.et al.
    • 雑誌名

      Forensic Science International 136

      ページ: 208-209

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Nitric oxide synthase expressions in rat dorsal root ganglion after application of a hind limb tourniquet2003

    • 著者名/発表者名
      Abe Sumiko, Mizusawa Ikubumi, Kanno Katsuyuki, Yabashi Atsuko, Suto Miwako, Kuraya Mikio, Honda Takashi, Hiraiwa Kouichi
    • 雑誌名

      Neuro Report 14

      ページ: 2267-2270

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] IL-6 and iNOS expressions in a rat kidney after release of a tourniquet applied to a hind limb2003

    • 著者名/発表者名
      Hiraiwa Kouichi, Abe Sumiko, Suto Miwako, Mizusawa Ikubumi, Kuraya Mikio, Honda Takashi
    • 雑誌名

      Forensic Science International 136, 136

      ページ: 208-209

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Expression of cytokines, neurotrophins, neurotrophin receptors and NOS mRNA in dorsal root ganglion of a rat tourniquet model2003

    • 著者名/発表者名
      Mizusawa Ikubumi, Abe Sumiko, Kanno Katsuyuki, Yabashi Atsuko, Honda Takashi, Suto Miwako, Hiraiwa Kouichi
    • 雑誌名

      Legal Medicine 5

      ページ: 271-274

    • NAID

      50000252333

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Changes in mRNA expression patterns for cytokines in blood Leukocytes of a rat tourniquet model2003

    • 著者名/発表者名
      Abe Sumiko, Kanno Katsuyuki, Yabashi, Mizusawa Ikubumi, Atsuko, Honda Takashi, Suto Miwako, Hiraiwa Kouichi
    • 雑誌名

      Legai Medicine 5

      ページ: 275-277

    • NAID

      50000252334

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Abe S.et al.: "Nitric oxide synthase expressions in rat dorsal root ganglion after application of a hind limb tourniquet"NeuroReport. 14(17). 2267-2270 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Hiraiwa K., Abe S.et al.: "IL-6 and iNOS expressions in a rat kidney after release of a tourniquet applied to a hind limb"Forensic Science International. 136. 208-209 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書

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公開日: 2003-04-01   更新日: 2016-04-21  

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