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乳児重症ミオクロニーてんかんにて検出される変異型イオンチャネル遺伝子の機能解析

研究課題

研究課題/領域番号 15591110
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 小児科学
研究機関岡山大学

研究代表者

大内田 守  岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教授 (80213635)

研究分担者 大守 伊織  岡山大学, 医学部・歯学部附属病院, 医員
研究期間 (年度) 2003 – 2004
研究課題ステータス 完了 (2004年度)
配分額 *注記
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2004年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
2003年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
キーワードてんかん / 遺伝子変異 / イオンチャネル
研究概要

乳児重症ミオクロニーてんかん(severe myoclonic epilepsy in infancy ; SMEI)は生後4-6ヶ月から熱性けいれんや種々のてんかん発作が出現する難治てんかん症候群のひとつである。我々はこの疾患の原因遺伝子の検索を目的とした遺伝子解析を行った結果、ナトリウムイオンチャネル遺伝子SCN1Aのアミノ酸変異を伴う遺伝子変異を検出した。このSCN1A遺伝子変異はSMEI患者において非常に高い相関が見られることより、これらのSCN1A遺伝子変異がSMEIの発症に重要な役割を担っていると考えられた。
そこで、変異型イオンチャネル蛋白の解析を行うことによりこれらの遺伝子変異がイオンチャネルの機能にどのような影響をもたらしているのかを明らかにする目的の為に、変異型および正常型遺伝子のSCN1A cDNAをクローニングし発現ベクターの構築を計画した。容易に蛋白局在が検出でき、蛋白機能に影響を与えず、かつ、膜への移行をさまたげないようなTagとしてLumio Tagを選び、その融合蛋白発現系を作成することにした。これは6アミノ酸からなり、特殊な蛍光物質と結合し強い蛍光を発するようになる領域である。まずこれらを正常型、変異型のC末に取り付けた発現ベクターを作成し、SCN1A遺伝子を発現していないヒト細胞株HEK293に導入した。生きたままの細胞に蛍光試薬を添加し蛍光顕微鏡で観察したところ、バックグラウンドの蛍光が非常に強く、局在を同定するのは困難であった。そこで、細胞固定後、界面活性剤処理を施した後に蛍光試薬を添加したところ、バックグラウンドの改善がみられ、ある種の変異型蛋白は細胞膜に局在することが判明した。この結果は抗SCN1A抗体を用いた免疫染色によっても確認された。このことは、正常蛋白と変異型が共発現している状態でも、変異型がDominant Negative効果により、細胞膜上で正常型の機能を阻害している可能性を示唆している。
また、cDNAを回収する過程で、ヒトの脳組織ではSCN1A遺伝子のIsoformが複数存在することを発見した。そこで、そのIsoformの解析を行ったところ、これらはエキソン11に、11アミノ酸および28アミノ酸の欠失を持つタイプであることを明らかにした。この領域はゲートを構成するドメインIとIIの間にある細胞内ループ領域であり、そこは高頻度で変異が見つかっている領域であることより、これらのIsoformもイオンチャネルの機能に影響を及ぼすのではないかと考えられた。

報告書

(3件)
  • 2004 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2003 実績報告書
  • 研究成果

    (21件)

すべて 2004 その他

すべて 雑誌論文 (13件) 文献書誌 (8件)

  • [雑誌論文] Establishment and characterization of a biphasic synovial sarcoma cell line, SYO-1.2004

    • 著者名/発表者名
      Kawai A.
    • 雑誌名

      Cancer Letters 204

      ページ: 105-113

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 実績報告書 2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Positive correlation between allelic loss at chromosome 14q24-31 and poor prognosis of patients with renal cell carcinoma.2004

    • 著者名/発表者名
      Kaku H.
    • 雑誌名

      Urology 64

      ページ: 176-181

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 実績報告書 2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Aberrant promoter methylation in human DAB2 interactive protein (hDAB2IP) gene in breast cancer.2004

    • 著者名/発表者名
      Dote H
    • 雑誌名

      Clinical Cancer Research 10

      ページ: 2082-2089

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Tumor-specific exon creation of the HELLS/SMARCA6 gene in non-small cell lung cancer.2004

    • 著者名/発表者名
      Yano M
    • 雑誌名

      International Journal Cancer. 112

      ページ: 8-13

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Prevalent hyper-methylation of the CDH13 gene promoter in malignant B cell lymphomas.2004

    • 著者名/発表者名
      Ogama Y
    • 雑誌名

      International Journal of Oncology 25

      ページ: 685-691

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Aberrant promoter methylation of human DAB2 interactive protein (hDAB2IP) gene in lung cancers.2004

    • 著者名/発表者名
      Yano M
    • 雑誌名

      International Journal Cancer 113

      ページ: 59-66

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Positive correlation between allelic loss at chromosome 14q24- 31 and poor prognosis of patients with renal cell carcinoma.2004

    • 著者名/発表者名
      Kaku H.
    • 雑誌名

      Urology 64

      ページ: 176-181

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Aberrant promoter methylation in human DAB2 interactive protein (hDAB2IP) gene in breast cancer.2004

    • 著者名/発表者名
      Dote H.
    • 雑誌名

      Clinical Cancer Research 10

      ページ: 2082-2089

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 実績報告書 2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Tumor-specific exon creation of the HELLS/SMARCA6 gene in non-small cell lung cancer.2004

    • 著者名/発表者名
      Yano M.
    • 雑誌名

      International Journal of Cancer 112

      ページ: 8-13

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Prevalent hyper-methylation of the CDH13 gene promoter in malignant B cell lymphomas.2004

    • 著者名/発表者名
      Ogama Y.
    • 雑誌名

      International Journal Oncology 25

      ページ: 685-691

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 実績報告書 2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Aberrant promoter methylation of human DAB2 interactive protein (hDAB2IP) gene in lung cancers.2004

    • 著者名/発表者名
      Yano M.
    • 雑誌名

      International Journal of Cancer 113

      ページ: 59-66

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2004 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Tumor-specific exon creation of the HELLS/SMARCA6 gene in non-small cell lung cancer.2004

    • 著者名/発表者名
      Yano M.
    • 雑誌名

      International Journal of Cancer. 112

      ページ: 8-13

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Aberrant promoter methylation of human DAB2 interactive protein (hDAB2IP) gene in lung cancers.2004

    • 著者名/発表者名
      Yano M.
    • 雑誌名

      International Journal of Cancer. 113

      ページ: 59-66

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [文献書誌] Ohmori, I.: "Is phenotype difference in severe myoclonic epilepsy in infancy related to SCN1A mutants?"Brain and Development. 25. 488-493 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Ohtsuka, Y.: "Paroxysmal movement disorders in severe myoclonic epilepsy in infancy."Brain and Development. 25. 406-410 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Beder, B.L.: "Genome-wide analyses on loss of heterozygosity in head and neck squamous cell carcinomas."Laboratory Investigation. 83. 99-105 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Morimoto, Y.: "Splicing isoform of SYT-SSX fusion protein accelerates transcriptional activity and cell proliferation."Cancer Letters. 199. 35-43 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Toyooka, S.: "Detection of codon 61 point mutations of the K-ras gene in lung and colorectal cancers by enriched PCR"Oncology Reports. 10. 1455-1459 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Koyama, M.: "Activated proliferation of B-cell lymphomas/leukemias with the SHP1 gene silencing by aberrant CpG methylation."Laboratory Investigation. 83. 1849-1858 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Morimoto, Y.: "Single nucleotide polymorphism in fibroblast growth factor receptor 4 at codon 388 is associated with prognosis in high-grade soft tissue sarcoma."Cancer. 98. 2245-2250 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Kawai, A.: "Establishment and characterization of a biphasic synovial sarcom cell line. SYO-1."Cancer Letters. 204. 105-113 (2004)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書

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公開日: 2003-04-01   更新日: 2016-04-21  

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