心臓死肝移植モデルにおけるトロンボモジュリンの阻血再潅流障害抑制効果

• 研究課題/領域番号: 15591419
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 消化器外科学
• 研究機関: 琉球大学
• 研究代表者: 白石 祐之 琉球大学, 医学部, 助教授 (00264482)
• 研究分担者: 宮国 孝男 琉球大学, 医学部附属病院, 講師 (00295320) ; 長浜 正吉 琉球大学, 医学部附属病院, 助手
• 研究期間 (年度): 2003 – 2005
• 研究課題ステータス: 完了 (2005年度)
• 配分額: 3,400千円 (直接経費: 3,400千円); 2005年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円); 2004年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円); 2003年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
• キーワード: トロンボモジュリン / 阻血再灌流障害 / アデノウィルスベクター / 遺伝子治療 / 温阻血障害 / 心臓死肝臓移植 / 遺伝子冶療 / 肝臓移植 / 心臓死

研究概要

トロンボモジュリン(Thrombomodulin:TM)/プロテインC系は、ヘパリン/アンチトロンビンIII系と並ぶ生体内の主要な抗凝固システムである。
脳死肝移植のドナー不足は深刻で、心臓死肝移植への適応拡大は重要な課題である。しかし、心臓死肝臓移植において温阻血障害は不可避であり、primary non functionの危険性が高い。これは、再灌流障害により移植片の類洞内皮細胞から抗凝固因子であるTMが喪失するために微小血栓が形成され、局所循環が障害されるためである。
組換えアデノウィルスを用いた遺伝子導入は、in vivo、静脈投与で肝臓特異的に高効率な遺伝子導入が可能である。そこで我々は、組換えアデノウィルスの静脈投与にて、ヒトTM遺伝子(hTM)をラット肝臓へ導入し、肝温阻血再灌流障害モデル(30分間の全肝阻血を行い、その後阻血を解除する)を用いて、TMの肝障害抑制効果について検討した。TM遺伝子導入群に対し、LacZ遺伝子導入群と非遺伝子導入群をコントロール群とした。再灌流6時間後、12時間後、24時間後、7日後に犠牲死させ、検体を採取した。
まず、hTM遺伝子の導入を、RT-PCRと免疫染色で確認した。
再灌流12時間後において、対象群と比較しTM遺伝子導入群で、AST、ALT、ヒアルロン酸の低下と組織血流量の増加を認めた。血清TM濃度に差はみられなかった。
病理像では、HE染色でコントロール群と比較し、TM群で肝障害が抑制され、好中球数の浸潤は、TM群で抑制された。
以上より、TM遺伝子を導入することで、再灌流12時間後において肝温阻血再灌流障害の抑制効果が認められた。