| 研究課題/領域番号 |
15591779
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
産婦人科学
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| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
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研究代表者 |
藤井 多久磨 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (10218969)
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| 研究分担者 |
塚崎 克己 慶應義塾大学, 医学部, 助教授 (40118972)
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| 研究期間 (年度) |
2003 – 2004
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| 研究課題ステータス |
完了 (2004年度)
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| 配分額 *注記 |
3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
2004年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
2003年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
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| キーワード | ペプチド / パピローマウイルス / 転写 / 複製 / 核移行シグナル |
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| 研究概要 |
HPVのE2蛋白質はE6・E7遺伝子の発現を調節しているDNA結合蛋白質であることから、ウイルス発癌の機構を解析する上で極めて重要な蛋白質といえる。そこで、E2蛋白質に結合し、その転写機能を阻害するペプチドを単離することを試みた。最初にHPV16型のE2蛋白質に結合するファージクローンを単離した。そのクローンを解析したところトリプトファンを含むペプチド配列が含まれていることがわかった。そこで、このトリプトファンをアラニンに置換したのち、E2蛋白質との結合性を比較したところ、変異ペプチドでは、その結合能が低下した。さらに,単離されたペプチド配列に核移行シグナルを付加した合成ペプチドを作成し、E2遺伝子の転写活性に及ぼす影響についてルシフェラーゼアッセイ法にて検討したところ、転写活性の低下が認められた。以上のことから、単離されたペプチドはE2蛋白質に結合し、その転写活性を抑制することが判明した。一方、このペプチド配列をもとにした塩基配列を発現ベクターに組み込み、細胞内でペプチドを強制発現させ転写活性を測定したが、効率よく転写活性を抑制する配列はいまのところ、みいだせていない。この理由としては、細胞内で有効なペプチドが発現されていないことが予想される。ところで、E2蛋白質はウイルス複製にも関与していることから、E2蛋白質を用いたin vitroウイルス遺伝子複製能試験を確立した。その系を用い上記ペプチドを添加し、遺伝子複製が阻害されるか否かを検討したが、複製阻害が認められるペプチドはなかった。以上より、我々の見出したペプチドはウイルス転写を特異的に阻害することがわかった。
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