| 研究概要 |
ヒトパピローマウイルス(HPV)が種々の前癌ならびに癌病変に検出されることから,HPV感染と発癌との関連が多くの注目を集めている.しかし,HPVには種特異性があり,HPVは動物に感染しないことから,HPVについてのin vivoでの感染実験を用いた癌化の証明は不可能である.我々は,dimethyl benzanthracene(DMBA)を用いて6-8週という短期間にハムスターの口腔粘膜に上皮性異形成,扁平上皮癌を誘発できる実験系を確立した.この病変から新しいハムスター口腔パピローマウイルス(HOPV)の分子クローニングを行い,この発癌モデルにおけるHOPVの関与について解析した結果,癌化過程でHOPVが重要な働きをしていることが明らかになった.このHOPV発癌モデルを用いてDNAワクチンよる癌化抑制についての検討を行なった.前年度では、HOPVのE6,E7,L1領域などの主要遺伝子のnaked pDNAおよびDNA複合体(pDNA/mBSA複合体)のDNAワクチンよる癌化抑制を解析したところ,naked pDNAよりもDNA複合体(pDNA/mBSA複合体)の方がより癌化抑制が良好なことが判明した.そこで本年度では、その投与方法、特に部位についての検討を行なった。HOPVのゲノムを培養細胞に発現させ、各主要遺伝子を増幅して発現プラスミドに挿入し、HOPVのnaked pDNAおよびDNA複合体(pDNA/mBSA複合体)を作成した.これらのHOPVのnaked pDNAおよびDNA複合体(pDNA/mBSA複合体)を上記の発癌モデルの口腔粘膜、腹腔内および筋肉内に接種して、その効果を検索したところ、HOPVのゲノムの主要遺伝子、特にE6,E7,L1領域のnaked pDNAおよびDNA複合体(pDNA/mBSA複合体)を口腔粘膜および筋肉内に接種したときに癌抑制効果があることが示唆された.この実験系を用いて,HOPVのE6,E7,L1領域などの主要遺伝子のnaked pDNAおよびDNA複合体(pDNA/mBSA複合体)の細胞取り込みを詳細に解析したところ,naked pDNAよりもDNA複合体(pDNA/mBSA複合体)の方がより取り込みが良好なことが判明した,また、投与部位としては、筋肉内が効果があり、さらに,電気穿孔法を併用することが有用なことも明らかになった.
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