siRNAを用いたヒトパピローマウイルス関連腫瘍の遺伝子標的治療の基礎研究

• 研究課題/領域番号: 15591991
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 病態科学系歯学・歯科放射線学
• 研究機関: 東京医科歯科大学
• 研究代表者: 大和 建嗣 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 講師 (50174751)
• 研究分担者: 山田 健人 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (60230463)
• 研究期間 (年度): 2003 – 2004
• 研究課題ステータス: 完了 (2004年度)
• 配分額: 3,500千円 (直接経費: 3,500千円); 2004年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円); 2003年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
• キーワード: HPV16 / HPV18 / siRNA / E6 / growth / HPV / p53 / Rb / siRN / in vivo

研究概要

ヒトパピローマウイルス16型(HPV-16)および18型(HPV-18)は、子宮頚癌の主な原因と考えられているが、口腔癌の一部の発症に深く関与する。HPV関連腫瘍においてこれらのウイルスの有するE6およびE7癌遺伝子の発現が必ず見られ、癌化とその維持にこれらの癌遺伝子の発現は必須であることから、遺伝子標的治療の理想的な候補である。
最近、21塩基の2本鎖RNAをほ乳類細胞に導入することにより、この配列に相補的な構造を持つmRNA特異的に分解し、これによって任意のmRNAの発現をknock-downする(siRNA)ことが可能になった。このsiRNAをHPV関連腫瘍の治療に応用するための基礎研究として、我々は、E6 siRNAのこれら癌遺伝子の発現に及ぼす効果と、HPV関連腫瘍の増殖に及ぼす効果を解析した。
我々は、HPVI6のE6およびE7の発現を抑制するためにこれらの癌遺伝子産物をコードするmRNAに共通の配列をターゲットとしたsiRNA(E6-3)を合成した。E6-3 siRNAは、HPV16陽性腫瘍細胞株であるSiHa細胞においてE6およびE7をコードするmRNAレベルを1/3に抑制し、同細胞の単層増殖、軟寒天培養におけるコロニー形成能、NOD/SCIDマウスにおける腫瘍形成能を特異的に抑制した。さらに,HPVl8についてもE6を標的としたsiRNAを合成し,細胞培養系でE6発現抑制とHPV18関連腫瘍細胞の増殖抑制に成功した。
以上より、HPV E6 siRNAは、HPV関連腫瘍のウイルス癌遺伝子の発現を抑制することにより、細胞の増殖と造腫瘍性を抑制できることが明らかとなった。今後、さらにin vivoでのHPV関連腫瘍の増殖抑制を達成するために、最適配列の決定と腫瘍細胞へのsiRNA導入方法を検討中である。

研究成果

• [雑誌論文] Induction of apoptosis in leukemic cells by homovanillic acid derivative, capsaicin, through oxidative stress : implication of phosphorylation of p53 at Ser-15 residue by reactive oxygen species. (2004)
  • 著者名/発表者名: Ito, K.et al.
  • 雑誌名: Cancer Res. 64 ページ: 1071-1078
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Induction of apoptosis in human myeloid leukemia cells by 1'-acetoxychavicol acetate (ACA) through a mitochondrial- and Fas-mediated dual mechanisum. (2004)
  • 著者名/発表者名: Ito, K.et al.
  • 雑誌名: Clinical Cancer Res. 10 ページ: 2120-2030
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Eradication of HPV post-surgical treatments, its correlation with specific types, types of surgery and the physical status. (2004)
  • 著者名/発表者名: Fen, J.et al.
  • 雑誌名: Oncol Rep. 12 ページ: 375-379
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Induction of apoptosis in leukemic cells by homovanillic acid derivative, capsaicin, through oxidative stress : implication of phosphorylation of p53 at Ser-15 residue by reactive oxygen species. (2004)
  • 著者名/発表者名: Ito, K., Nakazato, T., Yamato, K., Miyakawa, Y., Yamada, T.,, Hozumi, N., Segawa, K., Ikeda, Y., Kizaki, M.
  • 雑誌名: Cancer Res. 64 ページ: 1071-1078
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Induction of apoptosis in human myeloid leukemia cells by 1'-acetoxychavicol acetate (ACA) through a mitochondrial-and Fas-mediated dual mechanism. (2004)
  • 著者名/発表者名: Ito, K., Nakazawa, T., Murakami, A., Yamato, K., Miyakawa, Y., Yamada, T., Hozumi, N., Ohigashi, H., Ikeda, Y., Kizaki, M.
  • 雑誌名: Clinical Cancer Res. 10 ページ: 2120-2130
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Eradication of HPV post-surgical treatments, its correlation with specific types, types of surgery and the physical status. (2004)
  • 著者名/発表者名: Fen, J., Yoshinouchi, M., Nakamura.K., Kodama, J., Nasu, Y., Yamato, K., Hiramatsu, Y.
  • 雑誌名: Oncol.Rep. 12 ページ: 375-379
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Induction of apoptosis in leukemic cells by homovanillic acid derivative, capsaicin, through oxidative stress : implication of phosphorylation of p53 at Ser-15 residue by reactive oxygen species. (2004)
  • 著者名/発表者名: Ito, K., et al.
  • 雑誌名: Cancer Res. 64 ページ: 1071-1078
• [雑誌論文] Induction of apoptosis in human myeloid leukemia cells by 1'-acetoxychavicol acetate (ACA) through a mitochondrial- and Fas-mediated dual mechanism. (2004)
  • 著者名/発表者名: Ito, K., et al.
  • 雑誌名: Clinical Cancer Res. 10 ページ: 2120-2130
• [雑誌論文] Eradication of HPV post-surgical treatments, its correlation with specific types, types of surgery and the physical status (2004)
  • 著者名/発表者名: Fen, J., et al.
  • 雑誌名: Oncol Rep. 12 ページ: 375-379
• [雑誌論文] Caffeine induces G2/M arrest and apoptosis via novel p53-dependent pathway in NB4 promonocytic leukemia cells. (2003)
  • 著者名/発表者名: Ito, K.et al.
  • 雑誌名: J.Cell Physiol. 196 ページ: 276-283
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] In vitro and in vivo growth suppression of human papillomavirus (HPV)16-positive cervical cancer cells by E6 siRNA. (2003)
  • 著者名/発表者名: Yoshinouchi, M. et al.
  • 雑誌名: Mol.Ther. 8 ページ: 762-768
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Caffeine induces G2/M arrest and apoptosis via novel p53-dependent pathway in NB4 promonocytic leukemia cells. (2003)
  • 著者名/発表者名: Ito, K., Nakazoto, T., Miyakawa, Y., Yamato, K., Ikeda, Y., Kizaki, M.
  • 雑誌名: J.cell.Physiol. 196 ページ: 276-283
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] In vitro and in vivo growth suppression of human papillomavirus (HPV)16-positive cervical cancer cells by E6 siRNA. (2003)
  • 著者名/発表者名: Yoshinouchi, M., Yamada, T., Kizaki, M., Fen, J., Koseki, T., Ikeda, Y., Nishihara, T., Yamato, K.
  • 雑誌名: Mol.Ther. 8 ページ: 762-768
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Ito, K.et al.: "Caffeine induces G2/M arrest and apoptosis via novel p53-dependent pathway in NB4 promonocytic leukemia cells."J.Cell Physiol.. 196. 276-283 (2003)
• [文献書誌] Yoshinouchi, M. et al.: "In vitro and in vivo growth suppression of human papillomavirus (HPV)16-positive cervical cancer cells by E6 siRNA."Mol.Ther.. 8. 762-768 (2003)
• [文献書誌] Ito, K.et al.: "Induction of apoptosis in leukemic cells by homovanillic acid derivative, capsaicin, through oxidative stress : implication of phosphorylation of p53 at Ser-15 residue by reactive oxygen species."Cancer Res.. 64. 1071-1078 (2004)