アポトーシス誘導後の断片化DNAの修復

• 研究課題/領域番号: 15659042
• 研究種目: 萌芽研究
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 解剖学一般(含組織学・発生学)
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 伊藤 恒敏 東北大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (90004746)
• 研究分担者: 曽我 浩之 東北大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (20282121) ; 松谷 隆治 東北大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (70372290) ; 山岸 舞 東北大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (90332501)
• 研究期間 (年度): 2003 – 2004
• 研究課題ステータス: 完了 (2004年度)
• 配分額: 3,300千円 (直接経費: 3,300千円); 2004年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円); 2003年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
• キーワード: 小腸絨毛粘膜上皮 / TUNEL法 / DNA断片化 / 抗CD3抗体 / 腸上皮内リンパ球(IEL) / DNA修復 / TNF / パーフォリン

研究概要

我々は腸上皮内リンパ球(IEL)の機能を調べる目的で、抗CD3抗体投与で、小腸(十二指腸、空腸)絨毛上皮にDNA断片化を伴うアポトーシスが誘導されることを見いだした。DNA断片化を起こした小腸上皮は、抗体投与後約4時間で管腔に剥離し、絨毛全長にアポトーシスが誘導されたにもかかわらず、約半分は剥離せずに残る。剥離せずに残った小腸絨毛上皮細胞は、TUNEL陰性となる。本研究は、抗CD3抗体投与で引き起こされる小腸絨毛上皮細胞のDNA断片化が実際に修復されるのかどうか、を確認することが目的である。
本年度の実施結果:
(1)抗CD3抗体投与により小腸絨毛上皮細胞にDNA断片化が繰り返し引き起こされることを確認した。
(2)TUNEL染色がうまくいかず、時間が取られた。
(3)ブロモデオキシウリジン(BrdU)を3-4日間連続投与した実験で、抗体投与後(2-4時間後に)剥離したのちに残存した絨毛上皮はBrdUをきれいに取り込んでおり、抗体投与以前から存在した上皮であることが証明できた。
(4)しかも、残存した絨毛上皮細胞はすべてTUNEL染色陰性となる。(3)の結果と併せると、抗体投与後、剥離せずに残存した絨毛上皮細胞では一度は断片化したDNAが修復されたことを強く示唆する状況証拠が得られた。

研究成果

• [雑誌論文] Accumulation of intestinal intraepithelial lymphocytes in association with lack of polymeric immunoglobulin receptor. (2005)
  • 著者名/発表者名: Yamazaki, K., Shimada, S., Kato-Nagoka, N., Soga, H., Itoh, T., Nanno, M.
  • 雑誌名: Eur.J.Immunol. (In press)
• [雑誌論文] DNA fragmentation and detachment of enterocytes induced by anti-CD3 mAb-activated intraepithelial lymphocytes. (2004)
  • 著者名/発表者名: Yaguchi, K., Kayaba, S., Soga, H., Yamagishi, M., Tamura, A., Kasahara, S., Itoh, T.
  • 雑誌名: Cell Tissue Res. 315 ページ: 71-84
• [雑誌論文] Evidence for existence of oligoclonal tumor-infiltrating lymphocytes and predominant production of T helper1/cytotoxic 1 type cytokines in gastric and colorectal tumors. (2004)
  • 著者名/発表者名: Matsutani, T., Shiiba, K., Yoshioka, T., Tsuruta, Y., Suzuki, R., Ochi, T., Itoh, T., Musha, H., Mizoi, T., Sasaki, I.
  • 雑誌名: Int.J.Oncol. 25 ページ: 133-141
• [文献書誌] Tamura, A., Soga, H., Yaguchi, K., Yamagishi, M., Toyota, T., Sato, J., Oka, Y., Itoh, T.: "Distribution of two types of lymphocytes (intraepithelial and lamina-propria-associated) in the murine small intestine."Cell Tissue Res.. 313. 47-53 (2003)
• [文献書誌] Yaguchi, K., Kayaba, S., Soga, H., Yamagishi, M., Tamura, A., Kasahara, S., Itoh, T.: "DNA fragmentation and detachment of enterocytes induced by anti-CD3 mAb-activated intraepithelial lymphocytes."Cell Tissue Res.. 315. 71-84 (2004)