| 研究課題/領域番号 |
15780214
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| 研究種目 |
若手研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
応用分子細胞生物学
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| 研究機関 | 京都工芸繊維大学 |
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研究代表者 |
市川 明 京都工芸繊維大学, 繊維学部, 助手 (90346122)
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| 研究期間 (年度) |
2003 – 2005
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| 研究課題ステータス |
完了 (2005年度)
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| 配分額 *注記 |
3,800千円 (直接経費: 3,800千円)
2005年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2004年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2003年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
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| キーワード | トランスグルタミナーゼ / タンパク質基質 / ベタイン-ホモシステインメチルトランスフェラーゼ / ホモシステイン代謝 / 相互作用タンパク質検索 / 翻訳後修飾 / 老化 / モノクローナル抗体 / 架橋形成 / アミン導入 |
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| 研究概要 |
1.老化モデル実験動物を用いたTGase、BHMT活性変動とHcy濃度の因果関係の検証
老化に伴うTGase活性変動によるBHMTの架橋化、活性低下が血中Hcy濃度上昇に寄与しているかどうかを検討するために、平成15年度より飼育開始した自然老化マウス(Std : ddY)および平成16年度より飼育開始した老化促進モデルマウス(SAMP1)のそれぞれから血漿を採取して血中Hcy濃度を測定し、加齢に伴う血中Hcy濃度変化を検討した。その結果、Std : ddYおよびSAMP1で加齢にともなうTGase活性と血中Hcy濃度の上昇がみられた。このことから加齢マウスにおいてBHMTの架橋修飾の検出と酵素活性の低下が予測されたが、いずれも検出されなかった。逆に、Std : ddYではBHMT酵素の発現量と活性が共に上昇しており、BHMTは何らかの原因で上昇したHcyによって酵素発現が誘導される可能性が示唆された。これらの結果から、加齢に伴うTGaseによるBHMT架橋修飾と血中Hcy濃度上昇との因果関係は見いだせなかった。
2.酵母Two-Hybrid法によるTGase相互作用タンパク質の検索・同定
前年度までにマウス肝cDNAライブラリーからCytoTrap酵母Two-Hybridシステムを用いて取得したマウス肝TGaseと相互作用するタンパク質候補38クローンのTwo-Hybrid法による相互作用の確認を行った結果、全てのクローンが温度耐性復帰変異体であることが判明した。このためスクリーニング系の問題点を検証した結果、酵母のトランスフォーメーション効率を上げることで新たに38個の陽性クローンの取得に成功した。現在、塩基配列解析による相互作用タンパク質候補の同定を行っている。また、ヒト脳における神経変性疾患にTGaseか関与することが示唆されていることから、ヒト脳cDNAライブラリーからの相互作用タンパク質のスクリーニングも開始した。今後、同定した相互作用タンパク質の加齢に伴うTGase活性制御における役割を検討する予定である。
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