| 研究課題/領域番号 |
15790139
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| 研究種目 |
若手研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
薬理学一般
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| 研究機関 | 東邦大学 |
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研究代表者 |
堀之内 孝広 東邦大学, 薬学部, 助手 (20307771)
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| 研究期間 (年度) |
2003 – 2005
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| 研究課題ステータス |
完了 (2004年度)
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| 配分額 *注記 |
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2004年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
2003年度: 2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
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| キーワード | β-アドレナリン受容体 / 平滑筋 / 結合実験 / 組織片 / [^3H]-CGP12177A / 定量 / β_3-アドレナリン受容体 / β-アドレナリン受容体サブタイプ / 血管平滑筋 / 消化管平滑筋 / 弛緩反応 / ブプラノロール / CGP12177A / mRNA |
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| 研究概要 |
少量の平滑筋組織におけるβ-アドレナリン受容体(β-AR)の定量を可能にするため、極小の組織片を用いた新規受容体結合実験法を確立した。なお、本研究では、この結合実験法を普遍化するため、平滑筋組織の他、β-ARが高密度に発現している心房・肺・眼組織についても検討した。本研究より得られた知見を次に示す。
1.受容体結合実験に使用する組織量
(1)極少量の組織、例えば、ラット一個体分の心房、ウサギ一個体分の眼組織のみで、一例分の飽和実験もしくは置換実験が実施可能。
2.放射性リガンド
(1)水溶性放射性リガンドである[^3H]-CGP12177Aを用いて、細胞膜上のβ-ARのみを特異的に定量可能。
(2)脂溶性放射性リガンドである[^3H]-dihydroalprenololでは、非特異的結合が高いため、定量不可能。
3.組織・β-ARサブタイプによる違い
(1)適用可能な平滑筋:ウサギ結腸紐(β_1/β_2)・膀胱(β_1/β_2)・虹彩(β_2)・毛様体筋(β_2)における[^3H]-CGP12177Aの非特異的結合は低く、また、その特異的結合は、2000pM以下の濃度で飽和した。
(2)適用不可能な平滑筋:低濃度(50-2000pM:β_1/β_2)及び高濃度(1-100nM:β_3)の[^3H]-CGP12177Aを用いて、各サブタイプの定量を試みた。ラット胃底・回腸・膀胱・胸部大動脈・腹部大動脈、ウサギ胸部大動脈・気管支平滑筋、ヒト膀胱では、全結合に対する非特異的結合の割合が高く、特異的結合を良好に分離することは困難であった。
(3)適用可能な平滑筋以外の組織:ウサギ心房(β_1)・肺(β_1/β_2)・毛様体突起(β_2)、ヒト肺(β_1/β_2)における[^3H]-CGP12177Aの非特異的結合は低く、また、その特異的結合は、2000pM以下の濃度で飽和した。
以上の知見から、組織片を用いた受容体結合実験法は、極少量の組織(非特異的結合が著しく高い組織や受容体密度が低い組織を除く)における細胞膜上のβ-ARの定量を可能にすることが示唆された。
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