クルーズトリパノソーマと作用する宿主分子のファージディスプレイ法による網羅的検索

• 研究課題/領域番号: 15790218
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 寄生虫学(含衛生動物学)
• 研究機関: 順天堂大学
• 研究代表者: 吉田 彩子 順天堂大学, 医学部, 助手 (20343486)
• 研究期間 (年度): 2003 – 2004
• 研究課題ステータス: 完了 (2004年度)
• 配分額: 3,500千円 (直接経費: 3,500千円); 2004年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円); 2003年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
• キーワード: ファージディスプレイ法 / Trypanosoma cruzi / 無鞭毛型原虫 / ヒト心筋蛋白質分子 / scaffold attachment factor B / sialidase homolog / ribosomal protein L18a / ヒト心筋タンパク質 / KIAAO220 / ring finger protein 28 / translation initiation factor 2

研究概要

Trypanosoma cruzi感染による慢性症状の1つとして心筋炎が挙げられる。本研究では、T.cruzi原虫-宿主細胞間の相互作用分子を、原虫の心筋細胞寄生モデルを用いて網羅的に検索した。まず、細胞内寄生型であるT.cruzi無鞭毛型原虫の分泌蛋白質(Ama-ES)と反応するヒト心筋細胞cDNAファージライブラリーのスクリーニングを行った結果、ヒト側の候補蛋白質分子の1つとして、scaffold attachment factor B(SAF-B)が得られた。そこで次に、SAF-BのAma-ESと反応した領域(アミノ酸残基1〜107)について大腸菌による組換え体SAF-B(rSAF-B)を作製して、これと反応するT7ファージ無鞭毛型原虫cDNAライブラリーのスクリーニングを行い、SAF-Bと反応する数種類の原虫側候補蛋白質分子を同定した。さらに、それぞれの候補分子のT7ファージコード領域について、ウサギ網状赤血球ライセートを用いたin vitro発現系で組換え体蛋白質を合成し、rSAF-Bとの蛋白質分子同士での反応性を検討したところ、組換え体sialidase homologとribosomal protein L18aについてはrSAF-Bとの結合を示す結果が得られた。SAF-Bにはクロマチンの構造形成・維持やmRNAの転写調節、RNAプロセッシングへの関与といった様々な機能が報告されている。T.cruzi感染時に見られる病態が、本研究においてSAF-Bとの相互作用が明らかとなった原虫分子による宿主SAF-Bの機能修飾の結果であるならば、これらの分子間作用の更なる解析は、病態の発生機構の解明のみならず、これらの分子をターゲットとした治療法の開発につながる可能性が期待できる。以上の結果に関しては、第74回日本寄生虫学会大会で発表の予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Molecular cloning and characterization of Trypanosoma vivax alternative oxidase (AOX) gene, a target of the trypanocide ascofuranone. (2004)
  • 著者名/発表者名: Suzuki T, Nihei C, Yabu Y, Hashimoto T, Suzuki M, Yoshida A, Nagai K et al.
  • 雑誌名: Parasitology International 53(3) ページ: 235-245
  • NAID: 10014235391
• [雑誌論文] Research on calpain of Schistosoma japonicum as a vaccine candidate. (2004)
  • 著者名/発表者名: Ohta N, Kumagai T, Maruyama H, Yoshida A, He Y, Zhang R
  • 雑誌名: Parasitology International 53(2) ページ: 175-181
  • NAID: 10014235258
• [雑誌論文] The efficacy of ascofuranone in a consecutive treatment on Trypanosoma brucei brucei in mice. (2003)
  • 著者名/発表者名: Yabu Y, Yoshida A, Suzuki T, Nihei C, Kawai K, Minagawa N et al.
  • 雑誌名: Parasitology International 52(2) ページ: 155-164
  • NAID: 10012543172
• [雑誌論文] Intraepithelial infiltration of eosinophils and their contribution to the elimination of adult intestinal nematode, Strongyloides venezuelensis in mice. (2003)
  • 著者名/発表者名: El-Malky M, Maruyama H, Shimada S, Hirabayashi Y, Yoshida A et al.
  • 雑誌名: Parasitology International 52(1) ページ: 71-79
  • NAID: 50000738993
• [雑誌論文] Adult worms of the rodent intestinal nematode, Strongyloides venezuelensis, successfully invade chick intestinal mucosa. (2003)
  • 著者名/発表者名: Maruyama H, Aoki M, Okamura S, Yoshida A, Itagaki T, Ohta N
  • 雑誌名: Parasitology International 52(1) ページ: 35-39
• [文献書誌] Yabu Y, Yoshida A, Suzuki T, Nihei C, Kawai K, Minagawa N er al.: "The efficacy of ascofuranone in a consecutive treatment on Trypanosoma brucei brucei in mice."Parasitology International. 52(2). 155-164 (2003)
• [文献書誌] El-Malky M, Maruyama H, Shimada S, Hirabayashi Y, Yoshida A et al.: "Intraepithelial infiltration of eosinophils and their contribution to the elimination of adult intestinal nematode, Strongyloides venezuelensis in mice."Parasitology International. 52(1). 71-79 (2003)
• [文献書誌] Maruyama H, Aoki M, Okamura S, Yoshida A, Itagaki T, Ohta N: "Adult worms of the rodent intestinal nematode, Strongyloides venezuelensis, successfully invade chick intestinal mucosa."Parasitology International. 52(1). 35-39 (2003)