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スプライシング因子の新規機能を利用した動物細胞ディスプレー技術の高度化

研究課題

研究課題/領域番号 15H04196
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 生物機能・バイオプロセス
研究機関岡山大学

研究代表者

金山 直樹  岡山大学, ヘルスシステム統合科学研究科, 准教授 (70304334)

研究分担者 徳光 浩  岡山大学, ヘルスシステム統合科学研究科, 教授 (20237077)
曲 正樹  岡山大学, ヘルスシステム統合科学研究科, 助教 (50359882)
研究期間 (年度) 2015-04-01 – 2019-03-31
研究課題ステータス 完了 (2018年度)
配分額 *注記
16,640千円 (直接経費: 12,800千円、間接経費: 3,840千円)
2018年度: 3,380千円 (直接経費: 2,600千円、間接経費: 780千円)
2017年度: 4,810千円 (直接経費: 3,700千円、間接経費: 1,110千円)
2016年度: 4,030千円 (直接経費: 3,100千円、間接経費: 930千円)
2015年度: 4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円)
キーワード抗体 / バイオテクノロジー / 細胞工学 / DT40 / AID / 抗体工学 / 変異 / SRタンパク質
研究成果の概要

申請者は、抗体遺伝子の変異能力を有するニワトリB細胞株DT40を利用して動物細胞ディスプレー技術を構築した。本研究では、抗原結合による生存シグナルの惹起と抗体遺伝子変異の誘導におけるSRSF1の機能の一端を明らかにし、スプライシング因子の発現操作により、外来からDT40細胞に導入した抗体遺伝子、非抗体遺伝子への変異導入効率を向上させるのに有効であることを見いだした。一方、変異導入効率に有効な導入遺伝子の最適化法も見いだした。

研究成果の学術的意義や社会的意義

標的に特異的に結合する抗体は、抗体医薬と呼ばれる副作用の低い次世代の分子標的治療薬として活用されてきている。抗体医薬開発での問題の一つに抗体ライブラリーの多様性の不足が考えられ、本研究は有用な活性を有する変異抗体を含む質の高い抗体ライブラリーの効率的作製に寄与しうる。

報告書

(5件)
  • 2018 実績報告書   研究成果報告書 ( PDF )
  • 2017 実績報告書
  • 2016 実績報告書
  • 2015 実績報告書
  • 研究成果

    (28件)

すべて 2019 2018 2017 2016 2015 その他

すべて 雑誌論文 (9件) (うち査読あり 9件、 謝辞記載あり 1件) 学会発表 (17件) 備考 (2件)

  • [雑誌論文] Regulation of Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase kinase β by cAMP signaling.2019

    • 著者名/発表者名
      Takabatake S, Ohtsuka S, Sugawara T, Hatano N, Kanayama N, Magari M, Sakagami H, Tokumitsu H.
    • 雑誌名

      Biochim Biophys Acta Gen Subj.

      巻: 1863 号: 4 ページ: 672-680

    • DOI

      10.1016/j.bbagen.2018.12.012

    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Interaction of S100A6 with Target Proteins In Vitro and in Living Cells2019

    • 著者名/発表者名
      Sakane Kyohei、Yamaguchi Fuminori、Tsuchiya Mitsumasa、Kondo Rina、Kanayama Naoki、Magari Masaki、Hatano Naoya、Kobayashi Ryoji、Tokumitsu Hiroshi
    • 雑誌名

      Methods in Molecular Biology

      巻: 1929 ページ: 367-377

    • DOI

      10.1007/978-1-4939-9030-6_23

    • ISBN
      9781493990290, 9781493990306
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Interleukin 34 (IL-34) cell-surface localization regulated by the molecular chaperone 78-kDa glucose-regulated protein facilitates the differentiation of monocytic cells2018

    • 著者名/発表者名
      Ogawa Sayaka、Matsuoka Yukiko、Takada Miho、Matsui Kazue、Yamane Fumihiro、Kubota Eri、Yasuhara Shiori、Hieda Kentaro、Kanayama Naoki、Hatano Naoya、Tokumitsu Hiroshi、Magari Masaki
    • 雑誌名

      Journal of Biological Chemistry

      巻: 294 号: 7 ページ: 2386-2396

    • DOI

      10.1074/jbc.ra118.006226

    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] SRSF1-3 contributes to diversification of the immunoglobulin variable region gene by promoting accumulation of AID in the nucleus2017

    • 著者名/発表者名
      Yuka Kawaguchi, Hiroaki Nariki, Naoko Kawamoto, Yuichi Kanehiro, Satoshi Miyazaki, Mari Suzuki, Masaki Magari, Hiroshi Tokumitsu, Naoki Kanayama
    • 雑誌名

      Biochemical and Biophysical Research Communications

      巻: 485 号: 2 ページ: 261-266

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2017.02.097

    • NAID

      120006425839

    • 関連する報告書
      2017 実績報告書 2016 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Identification and characterization of a centrosomal protein, FOR20 as a novel S100A6 target2017

    • 著者名/発表者名
      Kyohei Sakane, Miyu Nishiguchi, Miwako Denda, Fuminori Yamagchi, Masaki Magari, Naoki Kanayama, Ryo Morishita, Hiroshi Tokumitsu
    • 雑誌名

      Biochemical and Biophysical Research Communications

      巻: 491 号: 4 ページ: 980-985

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2017.07.161

    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] AMP-activated protein kinase-mediated feedback phosphorylation controls the Ca2+/calmodulin (CaM) dependence of Ca2+/CaM-dependent protein kinase kinase β2017

    • 著者名/発表者名
      Akihiro Nakanishi, Naoya Hatano, Yuya Fujiwara, Arian Sha'ri, Shota Takabatake, Hiroki Akano, Naoki Kanayama, Masaki Magari, Naohito Nozaki, Hiroshi Tokumitsu
    • 雑誌名

      Journal of Biological Chemistry

      巻: 292 号: 48 ページ: 19804-19813

    • DOI

      10.1074/jbc.m117.805085

    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Identification of striated muscle activator of Rho signaling (STARS) as a novel calmodulin target by a newly developed genome-wide screen.2016

    • 著者名/発表者名
      Yusui Furuya, Miwako Denda, Kyohei Sakane, Tomoko Ogusu, Sumio Takahashi, Masaki Magari, Naoki Kanayama, Ryo Morishita, Hiroshi Tokumitsu
    • 雑誌名

      Cell calcium

      巻: 60 号: 1 ページ: 32-40

    • DOI

      10.1016/j.ceca.2016.04.004

    • 関連する報告書
      2016 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Differential AMP-activated Protein Kinase (AMPK) Recognition Mechanism of Ca2+/Calmodulin-dependent Protein Kinase Kinase Isoforms.2016

    • 著者名/発表者名
      Yuya Fujiwara, Yoshinori Kawaguchi, Tomohito Fujimoto, Naoki Kanayama, Masaki Magari, Hiroshi Tokumitsu
    • 雑誌名

      The Journal of biological chemistry

      巻: 291 号: 26 ページ: 13802-13808

    • DOI

      10.1074/jbc.m116.727867

    • 関連する報告書
      2016 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Analysis of Distinct Roles of CaMKK Isoforms using STO-609-Resistant Mutants in Living Cells.2015

    • 著者名/発表者名
      Fujiwara Y, Hiraoka Y, Fujimoto T, Kanayama N, Magari M, Tokumitsu H.
    • 雑誌名

      Biochemistry

      巻: 54 号: 25 ページ: 3969-3977

    • DOI

      10.1021/acs.biochem.5b00149

    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
    • 査読あり / 謝辞記載あり
  • [学会発表] スプライシング因子の過剰発現及び標的遺伝子配列の操作によるニワトリ B 細胞株における遺伝 子変異の増強2018

    • 著者名/発表者名
      金山 直樹, 太田 愛美, 西山 由美子, 岡 知里, 曲 正樹, 徳光 浩
    • 学会等名
      第70回 日本生物工学会大会
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
  • [学会発表] CaMKKβシグナル伝達のAMPKおよびPKAによるリン酸化制御機構の解明2018

    • 著者名/発表者名
      大塚 里美, 高畠 翔太, 金山 直樹, 曲 正樹, 徳光 浩
    • 学会等名
      第91回 日本生化学会大会
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
  • [学会発表] 濾胞樹状細胞が発現するIL-34の免疫学的作用についての解析2018

    • 著者名/発表者名
      松岡 由希子, 小川 紗也香, 安原 詩織, 金山 直樹, 德光 浩, 曲 正樹
    • 学会等名
      第41回 日本分子生物学会年会
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
  • [学会発表] 濾胞樹状細胞により誘導される単球系細胞によるB細胞活性化メカニズムの解明2018

    • 著者名/発表者名
      高田 美帆, 鳥家 雄二, 稗田 健太郎, 金山 直樹, 德光 浩, 曲 正樹
    • 学会等名
      第41回 日本分子生物学会年会
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
  • [学会発表] GRP78により発現制御される濾胞樹状細胞表面のIL-34が単球系細胞の分化に関与する2018

    • 著者名/発表者名
      小川 紗也香, 松岡 由希子, 高田 美帆, 松井 一恵, 山根 文寛, 安原 詩織, 金山 直樹, 波多野 直哉, 徳光 浩, 曲 正樹
    • 学会等名
      第41回 日本分子生物学会年会
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
  • [学会発表] 抗体遺伝子変異能力を操作できるニワトリB細胞を用いた動物細胞ディスプレイ2017

    • 著者名/発表者名
      金山 直樹, 太田 愛美, 西山 由美子, 清木 俊雄, 植月 英智, 川口 祐加, 仲尾 祐輝, 曲 正樹, 徳光 浩
    • 学会等名
      第69回 日本生物工学会大会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] スプライシング因子の過剰発現及び標的遺伝子配列の操作によるニワトリB細胞株における遺伝子変異の増強2017

    • 著者名/発表者名
      太田 愛美、西山 由美子、曲 正樹、徳光 浩、金山 直樹
    • 学会等名
      2017年度生命科学系学会合同年次大会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] 抗体遺伝子変異の転写関連過程におけるSRSF1-3の役割の解析2017

    • 著者名/発表者名
      金山 直樹、川口 祐加、横山 和輝、石橋 朋之、曲 正樹、徳光 浩
    • 学会等名
      2017年度生命科学系学会合同年次大会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] AID発現とSHM誘導におけるBCRシグナルの役割2017

    • 著者名/発表者名
      梶浦 雄也、金廣 優一、曲 正樹、徳光 浩、金山 直樹
    • 学会等名
      2017年度生命科学系学会合同年次大会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] AID発現とSHM誘導におけるBCRシグナルの役割2016

    • 著者名/発表者名
      梶浦 雄也、金廣 優一、有年 由貴子、曲 正樹、徳光 浩、金山 直樹
    • 学会等名
      第39回 日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜(神奈川県横浜市)
    • 年月日
      2016-12-02
    • 関連する報告書
      2016 実績報告書
  • [学会発表] 抗体遺伝子変異における転写依存性過程におけるSRSF1-3の役割の解析2016

    • 著者名/発表者名
      川口 祐加、横山 和輝、河本 奈緒子、成木 弘明、松山 雄磨、金廣 優一、曲 正樹、大森 斉、徳光 浩、金山 直樹
    • 学会等名
      第39回 日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜(神奈川県横浜市)
    • 年月日
      2016-12-02
    • 関連する報告書
      2016 実績報告書
  • [学会発表] 抗体遺伝子高頻度突然変異におけるssDNA形成へのSRSF1-3の関与の解析2016

    • 著者名/発表者名
      横山 和輝、川口 祐加、松山 雄磨、河本 奈緒子、成木 弘明、徳光 浩、曲 正樹、金山 直樹
    • 学会等名
      第39回 日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜(神奈川県横浜市)
    • 年月日
      2016-12-02
    • 関連する報告書
      2016 実績報告書
  • [学会発表] SRSF1-3の高度保存領域が抗体遺伝子変異に寄与する2016

    • 著者名/発表者名
      成木 弘明、川口 祐加、宮崎 誠士、河本 奈緒子、横山 和輝、徳光 浩、曲 正樹、金山 直樹
    • 学会等名
      第39回 日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜(神奈川県横浜市)
    • 年月日
      2016-12-02
    • 関連する報告書
      2016 実績報告書
  • [学会発表] スプライシング因子過剰発現による B 細胞株における抗体遺伝子変異の増強2016

    • 著者名/発表者名
      太田 愛美, 西山 由美子, 清木 俊雄, 植月 英智, 川口 祐加, 仲尾 祐輝, 曲 正樹, 徳光 浩, 金山 直樹
    • 学会等名
      第68回 日本生物工学会大会
    • 発表場所
      富山国際会議場(富山県富山市)
    • 年月日
      2016-09-29
    • 関連する報告書
      2016 実績報告書
  • [学会発表] ニワトリSRSF1-3の抗体遺伝子変異における機能部位の探索2015

    • 著者名/発表者名
      155成木 弘明, 川口 祐加, 宮崎 誠士, 河本 奈緒子, 横山 和輝, 徳光 浩, 曲 正樹, 金山 直樹
    • 学会等名
      BMB2015
    • 発表場所
      神戸国際会議場・展示場
    • 年月日
      2015-12-02
    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
  • [学会発表] ニワトリ B 細胞株における BCR シグナル依存性アポトーシスの制御による高親和性抗体の作製2015

    • 著者名/発表者名
      金山 直樹, 古賀 舞, 池田 美香, 小嶋 宏侑, 曲 正樹, 徳光 浩, 大森 斉
    • 学会等名
      第67回日本生物工学会大会
    • 発表場所
      鹿児島市
    • 年月日
      2015-10-27
    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
  • [学会発表] ニワトリB細胞株DT40におけるヒト型抗体の産生増強2015

    • 著者名/発表者名
      中谷 耕治, 檀上 悟史, 曲 正樹, 徳光 浩, 金山 直樹
    • 学会等名
      第67回日本生物工学会大会
    • 発表場所
      鹿児島市
    • 年月日
      2015-10-27
    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
  • [備考] 細胞機能設計学研究室

    • URL

      http://www.okayama-u.ac.jp/user/saibou/index.html

    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [備考] http://www.okayama-u.ac.jp/user/saibou/index.html

    • 関連する報告書
      2016 実績報告書

URL: 

公開日: 2015-04-16   更新日: 2020-03-30  

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