研究課題
基盤研究(B)
ヒトDNAポリメラーゼ・イータ（Polη）と紫外線損傷DNAとの共結晶構造に基づいて、鋳型DNAとの相互作用に重要と考えられるアミノ酸を置換したPolη点変異体を作成し、精製タンパク質の生化学的な解析を行った。またこれらの点変異体を発現するベクターを導入したXP-V細胞について、紫外線感受性および6-チオグアニン耐性による突然変異率の測定を行った。一方、ヒトPolηに対して阻害効果を示す化合物のスクリーニングを実施した。天然物由来の低分子化合物を固定化した化合物アレイを用い、Polηに結合する化合物を抽出、その中からPolηのプライマー伸長活性に対して阻害効果を示す化合物を絞り込んだ。
ヒトPolηと紫外線損傷DNAとの共結晶構造に基づいて、鋳型DNAとの相互作用に重要と考えられるアミノ酸を置換した点変異体タンパク質の解析から、鋳型DNAとの相互作用が弱い変異体は全て野生型と比較してDNA鎖の伸長反応が進みにくい結果となった。このことは結晶構造解析によるタンパク質の機能予測が非常に的確であることを示している。一方、天然物由来の低分子化合物を固定化した化合物アレイを用い、ヒトPolηに対して阻害効果を示す化合物のスクリーニングを行い、Polηに特異的な阻害剤の候補を選択した。これらは代表的な制がん剤であるシスプラチンとの併用により、制がん効果の増強に効果的な可能性がある。
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