EGF受容体および不良ミトコンドリアにおけるユビキチン修飾の実体解明

• 研究課題/領域番号: 15H06882
• 研究種目: 研究活動スタート支援
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 機能生物化学
• 研究機関: 公益財団法人東京都医学総合研究所
• 研究代表者: 土屋 光 公益財団法人東京都医学総合研究所, 生体分子先端研究分野, 研究員 (90760132)
• 研究期間 (年度): 2015-08-28 – 2017-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2016年度)
• 配分額: 2,730千円 (直接経費: 2,100千円、間接経費: 630千円); 2016年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円); 2015年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
• キーワード: ユビキチン / タンパク質分解

研究成果の概要

代表者らはユビキチン鎖結合プローブによるユビキチン鎖の保護とトリプシンによる限定分解を組み合わせることによりユビキチン鎖長を決定する手法を開発してきた。本研究では、代表者らが開発したユビキチン鎖長決定法および質量分析計によるユビキチン鎖の高感度絶対定量法を用いて、主要なユビキチン依存的経路である増殖因子受容体のダウンレギュレーションに焦点を当て解析した。FLAGタグ融合EGFR安定発現細胞をEGF刺激後、抗FLAG抗体により免疫沈降し、Ub-ProT法によりEGFRに付加されたユビキチン鎖の長さを検討した。この結果、EGF刺激により4-6個のK63鎖がEGFRに付加されることが明らかとなった。

研究成果

• [雑誌論文] In Vivo Ubiquitin Linkage-type Analysis Reveals that the Cdc48-Rad23/Dsk2 Axis Contributes to K48-linked Chain Specificity of the Proteasome (2017)
  • 著者名/発表者名: Hikaru Tsuchiya, Fumiaki Ohtake, Naoko Arai, Ai Kaiho, Sayaka Yasuda, Keiji Tanaka, and Yasushi Saeki
  • 雑誌名: Molecular Cell 巻: 印刷中
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] The complexity of ubiquitin architecture. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ohtake, F., and Tsuchiya, H
  • 雑誌名: J Biochem 巻: 161 ページ: 125-133
  • DOI: 10.1093/jb/mvw088
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [学会発表] Ubiquitin chain selectivity of ubiquitin-binding proteins in yeast (2016)
  • 著者名/発表者名: Hikaru Tsuchiya
  • 学会等名: 7th PROTEASOME and AUTOPHAGY WORKSHOP
  • 発表場所: Clermont-Ferrand, France
  • 年月日: 2016-04-06
  • 国際学会
• [学会発表] プロテアソーム依存的タンパク質分解経路におけるユビキチン鎖選択制の解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 土屋 光、吉原英人、新井直子、海保愛、田中啓二、佐伯泰
  • 学会等名: 第38回 日本分子生物学会 第88回 日本生化学会合同大会
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド (兵庫県神戸市)
  • 年月日: 2015-12-01