CRISPR/Cas9を用いた癌関連融合遺伝子の生成・生成抑制機構の解明

• 研究課題/領域番号: 15K00542
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 放射線・化学物質影響科学
• 研究機関: 長崎大学
• 研究代表者: 山内 基弘 長崎大学, 原爆後障害医療研究所, 助教 (60437910)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2017年度)
• 配分額: 4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円); 2017年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円); 2016年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円); 2015年度: 2,600千円 (直接経費: 2,000千円、間接経費: 600千円)
• キーワード: 融合遺伝子 / 癌 / CRISPR/Cas9 / DNA二本鎖切断 / DNA修復 / DNA-PKcs

研究成果の概要

本研究では、様々な癌、白血病、リンパ腫で見つかっている融合遺伝子をCRISPR/Cas9システムにより人為的に生成し、その生成頻度を定量するアッセイを樹立することにより、融合遺伝子の生成・生成抑制に関わる因子を同定することが目的であった。研究成果としてはまず、肺癌などでみられるEML4-ALK融合遺伝子の生成頻度をデジタルPCRで定量するアッセイの樹立に成功した。次にこのアッセイを用いて、主要なDSB修復因子であるDNA-PKcsが融合遺伝子の生成に重要であることを明らかにした。

研究成果

• [雑誌論文] Regulation of pairing between broken DNA-containing chromatin regions by Ku80, DNA-PKcs, ATM, and 53BP1 (2017)
  • 著者名/発表者名: Motohiro Yamauchi, Atsushi Shibata, Keiji Suzuki, Masatoshi Suzuki, Atsuko Niimi, Hisayoshi Kondo, Miwa Miura, Miyako Hirakawa, Keiko Tsujita, Shunichi Yamashita, Naoki Matsuda
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 7 号: 1 ページ: 41812-41812
  • DOI: 10.1038/srep41812
  • NAID: 120006987560
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [学会発表] Regulation of pairing between broken DNA-containing chromatin regions by Ku80, DNA-PKcs, ATM, and 53BP1. (2017)
  • 著者名/発表者名: 山内基弘、柴田淳史、鈴木啓司、鈴木正敏、新美敦子、近藤久義、三浦美和、平川美弥子、辻田啓子、山下俊一、松田尚樹
  • 学会等名: Ataxia Telangiectasia Workshop 2017
  • 発表場所: ミラノ（イタリア）
  • 国際学会
• [学会発表] CRISPR/Cas9を用いた癌関連融合遺伝子の生成頻度の定量アッセイの樹立 (2016)
  • 著者名/発表者名: 山内基弘
  • 学会等名: 第75回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県・横浜市）
• [学会発表] Establishment of a novel quantitative assay for cancer-related gene fusion using CRISPR/Cas9 (2016)
  • 著者名/発表者名: 山内基弘、平川美弥子、辻田啓子、松田尚樹
  • 学会等名: 第39回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県・横浜市）
• [学会発表] ATM and DNA-PKcs suppress pairing between multiple DNA double-strand breaks (2015)
  • 著者名/発表者名: 山内基弘、鈴木啓司、柴田淳史、新美敦子、鈴木正敏、近藤久義、三浦美和、平川美弥子、山下俊一、松田尚樹
  • 学会等名: 第38回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド（兵庫県神戸市）
  • 年月日: 2015-12-03
• [学会発表] ATMとDNA-PKcsによるDNA二本鎖切断同士の会合の抑制 (2015)
  • 著者名/発表者名: 山内基弘、柴田淳史、鈴木啓司
  • 学会等名: 第74回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 名古屋国際会議場（愛知県名古屋市）
  • 年月日: 2015-10-08
• [学会発表] Factors affecting interaction between multiple DNA double-strand breaks (2015)
  • 著者名/発表者名: 山内基弘、鈴木啓司、柴田淳史、鈴木正敏、近藤久義、三浦美和、平川美弥子、山下俊一、松田尚樹
  • 学会等名: 15th International Congress of Radiation Research
  • 発表場所: 国立京都国際会館（京都府京都市）
  • 年月日: 2015-05-26
  • 国際学会