遺伝子挿入のない安全なイヌ・ネコiPS細胞を用いた赤血球分化誘導の検討

• 研究課題/領域番号: 15K07747
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 獣医学
• 研究機関: 大阪府立大学
• 研究代表者: 鳩谷 晋吾 大阪府立大学, 生命環境科学研究科, 准教授 (40453138)
• 研究分担者: 杉浦 喜久弥 大阪府立大学, 生命環境科学研究科, 教授 (30171143) ; 竹中 重雄 大阪府立大学, 総合リハビリテーション学研究科, 教授 (10280067)
• 連携研究者: 中西 真人 国立研究開発法人産業技術総合研究所, その他部局等, 研究員 (10172355) ; 久末 正晴 麻布大学, 獣医学部, 准教授 (80333144)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2017年度)
• 配分額: 4,810千円 (直接経費: 3,700千円、間接経費: 1,110千円); 2017年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2016年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2015年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
• キーワード: iPS細胞 / 多能性幹細胞 / 再生医療 / 獣医学 / イヌ / ネコ / 血液 / センダイウイルスベクター / 獣医再生医療 / 再生獣医療

研究成果の概要

遺伝子挿入のない安全なiPS細胞をイヌとネコで作製し、血液細胞へ分化させることを目的として、以下の成果を得た。
①センダイウイルスベクターを用いてイヌとネコの胎子線維芽細胞にGFPを導入できることができた。②ネコでは、6因子とTGFβ阻害剤を添加することでiPS細胞の作製に成功した。これらは各種未分化マーカーの発現および3胚葉への分化能を確認した。③イヌでは、4因子とTGFβ阻害剤を添加することでiPS細胞の作製に成功した。また、自然に除去されるSeVdpを用いてヒトiPS細胞に類似した細胞コロニーが得られた。しかしながら、これらiPS細胞の血液細胞分化についてさらに検討が必要と考えられる。

研究成果

• [雑誌論文] Innate immunity mediated by dendritic cells/macrophages plays a central role in the early period in tumor treatment using gene of Mycobacterium tuberculosis antigen (2018)
  • 著者名/発表者名: Takahiro Ushigusa, Yoshiyuki Koyama, Tomoko Ito, Kenichi Watanabe, James K. Chambers, Aya Hasegawa, Kazuyuki Uchida, Ryoji Kanegi, Shingo Hatoya, Toshio Inaba, Kikuya Sugiura
  • 雑誌名: Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ 巻: 80 号: 2 ページ: 190-196
  • DOI: 10.1292/jvms.17-0466
  • NAID: 130006339616
  • ISSN: 0916-7250, 1347-7439
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Development of effective tumor immunotherapy using a novel dendritic cell?targeting Toll-like receptor ligand (2017)
  • 著者名/発表者名: De Silva Nadeeka H.、Akazawa Takashi、Wijewardana Viskam、Inoue Norimitsu、Oyamada Maremichi、Ohta Atsuko、Tachibana Yuki、Wijesekera Daluthgamage Patsy H.、Kuwamura Mitsuru、Nishizawa Yasuko、Itoh Kazuyuki、Izawa Takeshi、Hatoya Shingo、Hasegawa Tetsuya、Yamate Jyoji、Inaba Toshio、Sugiura Kikuya
  • 雑誌名: PLOS ONE 巻: 12 号: 11 ページ: 0188738-0188738
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0188738
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Generation of canine induced extraembryonic endoderm-like cell line that forms both extraembryonic and embryonic endoderm derivatives (2017)
  • 著者名/発表者名: Nishimura T, Unezaki N, Kanegi R, Wijesekera DPH, Hatoya S, Sugiura K, Kawate N, Tamada H, Imai H, Inaba T.
  • 雑誌名: Stem Cells and Development 巻: 印刷中 号: 15 ページ: 1111-1120
  • DOI: 10.1089/scd.2017.0026
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Feeder-independent canine induced pluripotent stem cells maintained under serum-free conditions (2017)
  • 著者名/発表者名: Nishimura T, Hatoya S, Kanegi R, Wijesekera DP, Sanno K, Tanaka E, Sugiura K, Hiromitsu Tamada NK, Imai H, Inaba T.
  • 雑誌名: Molecular Reproduction and Development 巻: 印刷中 号: 4 ページ: 329-339
  • DOI: 10.1002/mrd.22789
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Production of feline leukemia inhibitory factor with biological activity in Escherichia coli. (2016)
  • 著者名/発表者名: Kanegi R, Hatoya S, Tsujimoto Y, Takenaka S, Nishimura T, Wijewardana V, Sugiura K, Takahashi M, Kawate N, Tamada H, Inaba T.
  • 雑誌名: Theriogenology 巻: 印刷中 号: 2 ページ: 604-611
  • DOI: 10.1016/j.theriogenology.2016.02.013
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Positive correlation between patency and mRNA levels for cyclooxygenase-2 and prostaglandin E synthase in the uterine cervix of bitches with pyometra (2016)
  • 著者名/発表者名: Tamada H, Adachi N, Kawate N, Inaba T, Hatoya S, Sawada T.
  • 雑誌名: Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ 巻: 78 号: 3 ページ: 525-528
  • DOI: 10.1292/jvms.15-0520
  • NAID: 130005140898
  • ISSN: 0916-7250, 1347-7439
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression and localization of epidermal growth factor, transforming growth factor-α and epidermal growth factor receptor in the canine testis. (2016)
  • 著者名/発表者名: Tamada, H., Takemoto,K,, Tominaga, M., Kawate, N., Takahashi, M., Hatoya, S., Matsuyama, S., Inaba, T., Sawada, T.
  • 雑誌名: J. Reprod. Dev. 巻: 62 号: 1 ページ: 59-64
  • DOI: 10.1262/jrd.2015-079
  • NAID: 130005126327
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Feeding hydroalcoholic extract powder of Lepidium meyenii (maca) increases serum testosterone concentration and enhances steroidogenic ability of Leydig cells in male rats. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ohta, Y., Yoshida, K., Kamiya, S., Kawate, N., Takahashi, M., Inaba, T., Hatoya, S., Morii, H., Takahashi, K., Ito, M., Ogawa, H., Tamada, H.
  • 雑誌名: Andrologia. 巻: 48 号: 3 ページ: 347-354
  • DOI: 10.1111/and.12453
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Expression analyses of insulin-like peptide 3, RXFP2, LH receptor, and 3β-hydroxysteroid dehydrogenase in testes of normal and cryptorchid dogs. (2015)
  • 著者名/発表者名: Hannan, MA., Kawate, N., Kubo, Y., Pathirana, IN., Büllesbach, EE., Hatoya, S., Inaba, T., Takahashi, M., Tamada, H.
  • 雑誌名: Theriogenology. 巻: 84 号: 7 ページ: 1176-1184
  • DOI: 10.1016/j.theriogenology.2015.06.021
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Effect of ovarian hormones on maturation of dendritic cells from peripheral blood monocytes in dogs (2015)
  • 著者名/発表者名: Wijewardana V, Sugiura K, Wijesekera DPH, Hatoya S, Nishimura T, Kanegi R, Ushigusa T, Inaba T.
  • 雑誌名: Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ 巻: 77 号: 7 ページ: 771-775
  • DOI: 10.1292/jvms.14-0558
  • NAID: 130005089954
  • ISSN: 0916-7250, 1347-7439
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [学会発表] 医学・獣医学における幹細胞を用いた内科治療のエビデンス (2018)
  • 著者名/発表者名: 鳩谷晋吾
  • 学会等名: 日本獣医再生医療学会 第13回年次大会
  • 招待講演
• [学会発表] 獣医師が行う再生医療研究～小・大動物臨床への応用から畜産・動物保護～「ネコiPS細胞作製の試み」 (2018)
  • 著者名/発表者名: 鳩谷晋吾
  • 学会等名: 第17回日本再生医療学会総会
  • 招待講演
• [学会発表] 臨床応用へ向けたイヌiPS細胞の効率的な作製 (2018)
  • 著者名/発表者名: 塚本雅也、鳩谷晋吾、金城綾二、大高真奈美、西村健、中西真人、稲葉俊夫、杉浦喜久弥
  • 学会等名: 日本獣医再生医療学会 第13回年次大会
• [学会発表] 犬iPS細胞の基礎研究とその問題点 (2017)
  • 著者名/発表者名: 鳩谷晋吾
  • 学会等名: 日本再生医療学会
  • 発表場所: 仙台国際センター（宮城県仙台市）
  • 年月日: 2017-03-07
  • 招待講演
• [学会発表] 獣医再生医療における幹細胞の役割とは (2017)
  • 著者名/発表者名: 鳩谷晋吾
  • 学会等名: 日本獣医再生医療学会
  • 発表場所: 名古屋プライムセントラルタワー（愛知県名古屋市）
  • 年月日: 2017-02-11
  • 招待講演
• [学会発表] 幹細胞療法適応の展望と課題 (2017)
  • 著者名/発表者名: 鳩谷晋吾
  • 学会等名: 日本獣医再生医療学会
  • 発表場所: 名古屋プライムセントラルタワー（愛知県名古屋市）
  • 年月日: 2017-02-11
  • 招待講演
• [学会発表] Primed型およびNaive型イヌiPS細胞の効率的な作製方法の検討 (2017)
  • 著者名/発表者名: 塚本雅也、鳩谷晋吾、金城凌二、大高真奈美、西村健、中西真人、稲葉俊夫、杉浦喜久弥
  • 学会等名: 第160回日本獣医学会学術集会
• [学会発表] ネコ精巣上体および卵巣における冷蔵保存法の検討 (2017)
  • 著者名/発表者名: 花房佳祐、MD. EMTIAJ ALAM、鳩谷晋吾、辻本恭典、玉田尋通、川手憲俊、稲葉俊夫、杉浦喜久弥
  • 学会等名: 第160回日本獣医学会学術集会
• [学会発表] ネコiPS細胞株のセンダイウイルスベクターを用いた作製 (2016)
  • 著者名/発表者名: 沖田良太、鳩谷晋吾、杉浦喜久弥、大高真奈美、西村健、中西真人、稲葉俊夫
  • 学会等名: 第159回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 日本大学（神奈川県藤沢市）
  • 年月日: 2016-09-06
• [学会発表] イヌ体細胞を用いた人工誘導胚体外内胚葉細胞の作製と肝細胞への分化誘導 (2016)
  • 著者名/発表者名: 畦崎直哉、西村俊哉、金城綾二、Himali Wijesekera、鳩谷晋吾、杉浦喜久弥、川手憲俊、玉田尋通、今井裕、稲葉俊夫
  • 学会等名: 第159回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 日本大学（神奈川県藤沢市）
  • 年月日: 2016-09-06
• [学会発表] GENERATION OF MULTIPOTENT CANINE EXTRAEMBRYONIC ENDODERM-LIKE CELLS VIA THE FORMATION OF INDUCED PLURIPOTENT STEM CELLS. (2016)
  • 著者名/発表者名: Unezaki Naoya, Nishimura Toshiya, Kanegi Ryoji, Wijesekera Daluthgamage Patsy Himali, Sugiura, Kikuya, Hatoya Shingo, Kawate Noritoshi, Tamada Hiromichi, Imai Hiroshi and Inaba Toshio
  • 学会等名: the International Society for Stem Cell Research（ISSCR） ２０１６ Annual Meeting (国際学会）
  • 発表場所: サンフランシスコ
  • 年月日: 2016-06-22
  • 国際学会
• [学会発表] イヌiPS細胞のマトリゲル上での培養と間葉系幹細胞への分化誘導 (2016)
  • 著者名/発表者名: 西村俊哉、田中恵里菜、鳩谷晋吾、金城綾二、Daluthgamage Pasty Himali Wijesekeral、杉浦喜久弥、玉田尋通、川手憲俊、今井裕、稲葉俊夫
  • 学会等名: 第15回日本再生医療学会総会
  • 発表場所: 大阪国際会議場（大阪府大阪市）
  • 年月日: 2016-03-17
• [学会発表] 再生医療 伴侶動物獣医療におけるESとiPS細胞の夢と現状 (2016)
  • 著者名/発表者名: 鳩谷晋吾
  • 学会等名: 第 12回 日本獣医内科学アカデミー学術大会(JCVIM 2016)
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2016-02-21
  • 招待講演
• [学会発表] 獣医再生医療の未来（ES,iPS細胞の基礎,基礎研究,臨床応用へ） (2016)
  • 著者名/発表者名: 鳩谷晋吾
  • 学会等名: 第11回日本獣医再生医療学会年次大会
  • 発表場所: ホテルクライトン新大阪（大阪府大阪市）
  • 年月日: 2016-02-06
  • 招待講演
• [学会発表] ネコの未成熟精子およびフリーズドライ精子による顕微授精 (2015)
  • 著者名/発表者名: 辻本恭典、鳩谷晋吾、金子武人、杉浦喜久弥、稲葉俊夫
  • 学会等名: 第158回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 北里大学獣医学部（青森県十和田市）
  • 年月日: 2015-09-07
• [学会発表] FEEDER-INDEPENDENT AND SERUM-FREE CANINE INDUCED PLURIPOTENT STEM CELLS REPROGRAMMED BY A DRUG-INDUCIBLE SYSTEM (2015)
  • 著者名/発表者名: Nishimura Toshiya, Kanegi Ryoji, Wijesekera Daluthgamage Patsy Himali, Sanno Kousuke, Tanaka Erina, Sugiura Kikuya, Hatoya Shingo, Kawate Noritoshi, Tamada Hiromichi, Imai Hiroshi, Inaba Toshio
  • 学会等名: The International Society for Stem Cell Research (ISSCR) 2015 Annual Meeting.
  • 発表場所: Stockholmsmassan Exhibition and Convention Center, Stockholm, Sweden
  • 年月日: 2015-06-24
  • 国際学会
• [備考] 細胞病態学教室ホームページ
  • URL: http://www.vet.osakafu-u.ac.jp/cell/
• [備考] 研究室ホームページ
  • URL: http://www.vet.osakafu-u.ac.jp/cell/
• [備考] http://www.vet.osakafu-u.ac.jp/cell/