Immuno-MS（質量分析）の臨床検査応用に向けた免疫複合体MS前処理法の開発

• 研究課題/領域番号: 15K08611
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 病態検査学
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 西村 基 千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (80400969)
• 研究分担者: 佐藤 守 千葉大学, 医学部附属病院, 特任准教授 (20401002)
• 連携研究者: 小寺 義男 北里大学, 理学部, 准教授 (60265733)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2017年度)
• 配分額: 4,940千円 (直接経費: 3,800千円、間接経費: 1,140千円); 2017年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2016年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円); 2015年度: 2,730千円 (直接経費: 2,100千円、間接経費: 630千円)
• キーワード: 質量分析 / ビタミンD / 細菌同定 / 病態検査学 / 臨床検査 / ペプチドミクス / プロテオミクス / 臨床検査医学 / イムノアッセイ

研究成果の概要

免疫複合体よりLC(液体クロマトグラフィー)を用いずに抗原（ペプチド・たんぱく質）を分離し測定する質量分析前処理法を検討した。具体的には変性処理、限外ろ過を行い抗原を分離した。 比較的夾雑物に強いMALDI-MS(マトリックス支援レーザー脱離イオン化法による質量分析)を用いても理想的条件を外れると検出データには十分な再現性を得る事が困難であった。
さらにより広く腫瘍分泌物、肝疾患マーカー、ビタミンD代謝物等につき質量分析研究を行い査読論文を発表した。血液培養検体の細菌同定検査におけるMALDI-MSでは特殊なポリマーを用いる事でＬＣによらない前処理法によって臨床検査レベルの良好な成績を得た。

研究成果

• [雑誌論文] Assessing the accuracy of variant detection in cost-effective gene panel testing by next-generation sequencing (2018)
  • 著者名/発表者名: Fujiki R, Yoshida A, Ohara O, Morisaki H, Nishimura M, Ichikawa T, Morisaki T, YAO Y, Tanaka T, Matsushita K, Ikeda M, Maeda A.
  • 雑誌名: The Journal of Molecular Diagnostics 巻: in press
  • 査読あり
• [雑誌論文] Assessment by Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry of the Effects of Preanalytical Variables on Serum Peptidome Profiles Following Long-Term Sample Storage. (2018)
  • 著者名/発表者名: Tsuchida S, Satoh M, Umemura H, Sogawa K, Takiwaki M, Ishige T, Miyabayashi Y, Iwasawa Y, Kobayashi S, Beppu M, Nishimura M, Kodera Y, Matsushita K, Nomura F
  • 雑誌名: Proteomics. Clinical applications 巻: 15 号: 3 ページ: 47-53
  • DOI: 10.1002/prca.201700047
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Variant in C-terminal region of intestinal alkaline phosphatase associated with benign familial hyperphosphatasaemia. (2018)
  • 著者名/発表者名: Ishige T, Itoga S, Utsuno E, Nishimura M, Yoshikawa M, Kato N, Matsushita K, Yokosuka O, Nomura F
  • 雑誌名: Journal of medical genetics 巻: 10 号: 10 ページ: 47-53
  • DOI: 10.1136/jmedgenet-2017-104964
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Surveillance evaluation of the standardization of assay values for serum total 25-hydroxyvitamin D concentration in Japan. (2018)
  • 著者名/発表者名: Ihara H, Kiuchi S, Ishige T, Nishimura M, Matsushita K, Satoh M, Nomura F, Yamashita M, Kitajima I, Tsugawa N, Okano T, Hirota K, Miura M, Totani M, Hashizume N; Nutrition Division, Japan Society of Clinical Chemistry.
  • 雑誌名: Ann Clin Biochem. 巻: Epub ahead of print 号: 6 ページ: 0-0
  • DOI: 10.1177/0004563218765570
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Improved sensitivity of serum/plasma 1α,25-dihydroxyvitamin D quantification by DAPTAD derivatization (2017)
  • 著者名/発表者名: Ishige Takayuki, Satoh Mamoru, Ogawa Shoujiro, Nishimura Motoi, Matsushita Kazuyuki, Higashi Tatsuya, Nomura Fumio
  • 雑誌名: Clinica Chimica Acta 巻: 473 ページ: 173-179
  • DOI: 10.1016/j.cca.2017.08.033
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Applications of copolymer for rapid identification of bacteria in blood culture broths using matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry. (2017)
  • 著者名/発表者名: Ashizawa K, Murata S, Terada T, Ito D, Bunya M, Watanabe K, Teruuchi Y, Tsuchida S, Satoh M, Nishimura M, Matsushita K, Sugama Y, Nomura F
  • 雑誌名: Journal of microbiological methods 巻: 139 ページ: 54-60
  • DOI: 10.1016/j.mimet.2017.04.013
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A novel KCNQ1 nonsense variant in the isoform-specific first exon causes both jervell and Lange-Nielsen syndrome 1 and long QT syndrome 1: a case report. (2017)
  • 著者名/発表者名: Nishimura M, Ueda M, Ebata R, Utsuno E, Ishii T, Matsushita K, Ohara O, Shimojo N, Kobayashi Y, Nomura F
  • 雑誌名: BMC medical genetics 巻: 18 号: 1 ページ: 66-71
  • DOI: 10.1186/s12881-017-0430-7
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Rapid and cost-effective high-throughput sequencing for identification of germline mutations of BRCA1 and BRCA2 (2017)
  • 著者名/発表者名: Ahmadloo S, Nakaoka H, Hayano T, Hosomichi K, You H, Utsuno E, Sangai T, Nishimura M, Matsushita K, Hata A, Nomura F, Inoue I
  • 雑誌名: J Hum Genetics 巻: 印刷中 号: 5 ページ: 561-567
  • DOI: 10.1038/jhg.2017.5
  • NAID: 40021210379
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Serum cytokine and chemokine profiles in patients with juvenile muscular atrophy of distal upper extremity (Hirayama disease). (2017)
  • 著者名/発表者名: Beppu M, Sawai S, Misawa S, Mori M, Ito S, Sogawa K, Nishimura M, Matsushita K, Nomura F, Kuwabara S.
  • 雑誌名: J Neuroimmunol 巻: 302 ページ: 20-22
  • DOI: 10.1016/j.jneuroim.2016.11.011
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Development and validation of the simultaneous measurement of four vitamin D metabolites in serum by LC-MS/MS for clinical laboratory applications (2016)
  • 著者名/発表者名: Mamoru Satoh, Takayuki Ishige, Shoujiro Ogawa, Motoi Nishimura, Kazuyuki Matsushita, Tatsuya Higashi, Fumio Nomura
  • 雑誌名: Anal Bioanal Chem 巻: 408 号: 27 ページ: 7617-7627
  • DOI: 10.1007/s00216-016-9821-4
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Combined Secretomics and Transcriptomics Revealed Cancer-Derived GDF15 is Involved in Diffuse-Type Gastric Cancer Progression and Fibroblast Activation. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ishige T, Nishimura M, Satoh M, Fujimoto M, Fukuyo M, Semba T, Kado S, Tsuchida S, Sawai S, Matsushita K, Togawa A, Matsubara H, Kaneda A, Nomura F
  • 雑誌名: Sci Rep. 巻: 6 号: 1 ページ: 21681-21681
  • DOI: 10.1038/srep21681
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Coupling CDH17 and CLDN18 markers for comprehensive membrane-targeted detection of human gastric cancer. (2016)
  • 著者名/発表者名: Matsusaka K, Ushiku T, Urabe M, Fukuyo M, Abe H, Ishikawa S, Seto Y, Aburatani H, Hamakubo T, Kaneda A, Fukayama M.
  • 雑誌名: Oncotarget 巻: 7 号: 51 ページ: 64168-64181
  • DOI: 10.18632/oncotarget.11510
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Fibrinogen alpha C chain 5.9 kDa fragment (FIC5.9), a biomarker for various pathological conditions, is produced in post-blood collection by fibrinolysis and coagulation factors (2016)
  • 著者名/発表者名: Kikuchi W, Nishimura M, Kuga T, Tsuchida S, Saito T, Satoh M, Noda K, Kodera Y, Tomonaga T, Nomura F
  • 雑誌名: Clinical Proteomics 巻: 13 号: 1 ページ: 27-27
  • DOI: 10.1186/s12014-016-9129-6
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Familial lamin A/C mutation cardiomyopathy with arrhythmia substrate detected by cardiac magnetic resonance imaging and electroanatomical mapping. (2016)
  • 著者名/発表者名: Nishi T, Takaoka H, Funabashi N, Nishimura M, Ohara O, Makiyama T, Ueda M, Kajiyama T, Kobayashi Y.
  • 雑誌名: International Journal of Cardiology 巻: 209 ページ: 248-252
  • DOI: 10.1016/j.ijcard.2016.02.030
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Detection of Ubiquitinated Dermcidin in Gingival Crevicular Fluid in Periodontal Disease (2015)
  • 著者名/発表者名: Sachio Tsuchida , Mamoru Satoh, Masaki Takiwaki, Michiru Wakabayashi, Takayuki Ishige, Minako Beppu, Motoi Nishimura, Kazuyuki Matsushita, Fumio Nomura
  • 雑誌名: International Journal of Peptide Research and Therapeutics 巻: 1 ページ: 1-5
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Identification of Nocardia species using matrix-assisted laser desorption/ionization–time-of-flight mass spectrometry (2015)
  • 著者名/発表者名: Segawa S, Nishimura M, Sogawa K, Tsuchida S, Murata S, Watanabe M, Matsushita K, Kamei K and Nomura F.
  • 雑誌名: Clinical Proteomics 巻: 12 号: 1 ページ: 1-1
  • DOI: 10.1186/s12014-015-9078-5
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Assessment of Vitamin D Metabolism by LC-MS/MS (2015)
  • 著者名/発表者名: Ishige T, Satoh M, Ogawa S, Nishimura M, Higashi T, Nomura F.
  • 雑誌名: Rinsho Byori. 巻: 63 ページ: 457-464
  • NAID: 40020474101
• [雑誌論文] Laboratory medicine and sex differences (2015)
  • 著者名/発表者名: Nishimura M, Nomura F.
  • 雑誌名: Nihon Rinsho 巻: 73 ページ: 587-600
  • NAID: 40020398301
• [学会発表] 血液培養陽性検体よりの複数菌由来の核酸検出 (2018)
  • 著者名/発表者名: 西村 基
  • 学会等名: 第29回日本臨床微生物学会総会・学術集会
• [学会発表] LQT5(KCNE1)D85Nの合併による重症化が推定されたLQT2の1家系 (2017)
  • 著者名/発表者名: 西村基,齋藤直樹,江畑亮太,奥主健太郎,上田希彦,宇津野恵美,別府美奈子,松下一之,小原収,田中知明,小林欣夫,下条直樹,市川智彦
  • 学会等名: 第24回日本遺伝子診療学会大会
• [学会発表] 新規慢性肝疾患マーカーFIC5.9( Fibrinogen alpha C chain5.9kD fragment ) は凝固線溶の変動を反映する (2017)
  • 著者名/発表者名: 西村基,菊地渉,佐藤守,松下一之,小寺義男,田中知明, 野村文夫
  • 学会等名: 第57回日本臨床化学会年次学術集会
• [学会発表] 慢性肝疾患で低下する新規マーカーFIC5.9(Fibrinogen αC chain 5.9 kD fragment) の健常時産生メカニズム (2017)
  • 著者名/発表者名: 西村基
  • 学会等名: 第64回日本臨床検査医学会学術集会・第29回世界病理臨床検査医学会連合
  • 国際学会
• [学会発表] qPCR-HRM法およびNGSにより同定したAPC遺伝子Exon8欠損による家族性大腸腺腫症家系 (2016)
  • 著者名/発表者名: 松下一之、糸賀栄、石毛崇之、西村基、別府美奈子、内垣洋祐、宇津野恵美、澤部祐司、野村文夫
  • 学会等名: 日本臨床検査自動化学第48回大会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2016-09-23
• [学会発表] Long-PCRと大量並列シーケンシングによる家族性地中海熱の原因遺伝子MEFVの遺伝子学的検査 (2016)
  • 著者名/発表者名: 石毛崇之、糸賀栄、北村浩一、西村基、松下一之、野村文夫
  • 学会等名: 日本臨床検査自動化学第48回大会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2016-09-22
• [学会発表] 質量分析技術による「ゲノム・フリー」なApolipoprotein Eタイピング（迅速ApoE セロタイピング）を目指した試み (2016)
  • 著者名/発表者名: 西村 基
  • 学会等名: 第63回日本臨床検査医学会学術集会
  • 発表場所: 神戸国際会議場（兵庫県神戸市）
  • 年月日: 2016-09-02
• [学会発表] ゲノム解析における偶発的所見に対する遺伝カウンセリングの必要性と課題 (2016)
  • 著者名/発表者名: 松下一之、西村基、別府美奈子、糸賀栄、石毛崇之、北村浩一、宇津野恵美、澤部祐司、野村文夫
  • 学会等名: 第40回日本遺伝カウンセリング学会学術集会/ The 13th International Congress of Human Genetics
  • 発表場所: 国立京都国際会館（京都府京都市）
  • 年月日: 2016-04-06
  • 国際学会
• [学会発表] 遺伝性脊髄小脳変性症の複数の遺伝子変異を合併した症例における遺伝カウンセリング (2016)
  • 著者名/発表者名: 別府美奈子、澤井摂、宇津野恵美、石毛崇之、糸賀栄、磯瀬沙希里、新井公人、鈴木陽一、吉川由利子、西村基、野村文夫、桑原聡、松下一之
  • 学会等名: 第40回日本遺伝カウンセリング学会学術集会/ The 13th International Congress of Human Genetics
  • 発表場所: 国立京都国際会館（京都府京都市）
  • 年月日: 2016-04-06
  • 国際学会
• [学会発表] ミトコンドリアゲノム全周解析のための簡便な前処理法 (2016)
  • 著者名/発表者名: 西村 基、西村里美、姚躍、石毛崇之、糸賀栄、松下一之、野村文夫
  • 学会等名: 第40回日本遺伝カウンセリング学会学術集会/ The 13th International Congress of Human Genetics
  • 発表場所: 国立京都国際会館（京都府京都市）
  • 年月日: 2016-04-05
  • 国際学会
• [学会発表] 大学検査部に適した「質量分析手法を用いた次世代臨床検査」とは (2015)
  • 著者名/発表者名: 西村基
  • 学会等名: 日本臨床検査医学会
  • 発表場所: 長良川国際会議場（岐阜県岐阜市）
  • 年月日: 2015-11-19
  • 招待講演
• [学会発表] 自動分析法による血清25ヒドロキシビタミンD測定値の標準化：SRM 972aを校正に用いた測定 (2015)
  • 著者名/発表者名: 西村 基、佐藤 守、石毛崇之 、東 達也、 野村 文夫
  • 学会等名: 日本臨床化学会
  • 発表場所: 大阪大学コンベンションセンター（大阪府吹田市）
  • 年月日: 2015-10-30
  • 招待講演
• [学会発表] QT延長症候群遺伝子検査の次世代シーケンサーを用いた立ち上げとこれにより変異同定に至った Jervell and Lange-Nielsen Syndrome(JLNS) の一家系 (2015)
  • 著者名/発表者名: 西村基 宇津野 恵美 上田 希彦 江畑 亮太 内海 紀子 糸賀 栄 小原 令子 別府 美奈子 松下 一之 小原 収 野村 文夫
  • 学会等名: 日本人類遺伝学会
  • 発表場所: タワーホール船堀（東京都江戸川区）
  • 年月日: 2015-10-14
• [学会発表] 保険収載された遺伝子検査・遺伝カウンセリング加算と次世代シーケンサー (2015)
  • 著者名/発表者名: 西村基
  • 学会等名: 日本遺伝カウンセリング学会
  • 発表場所: 三井ガーデンホテル千葉(千葉県千葉市)
  • 年月日: 2015-06-26