転写因子FOXP3スプライシングバリアントの機能とアレルギー疾患への関与

• 研究課題/領域番号: 15K09557
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 膠原病・アレルギー内科学
• 研究機関: 帝京平成大学 (2016-2018); 昭和大学 (2015)
• 研究代表者: 根来 孝治 帝京平成大学, 薬学部, 教授 (70218270)
• 研究分担者: 中野 泰子 横浜薬科大学, 薬学部, 教授 (20155790) ; 清水 俊一 帝京平成大学, 薬学部, 教授 (60196516)
• 研究期間 (年度): 2015 – 2018
• 研究課題ステータス: 中途終了 (2018年度)
• 配分額: 4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円); 2017年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2016年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円); 2015年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
• キーワード: FOXP3スプライスバリアント / 調節性T細胞 / 気管支喘息 / アレルギー・ぜんそく / 制御性Ｔ細胞 / FOXP3 splicing variants / カルシウム応答性

研究実績の概要

申請者らは、これまでに制御性T細胞(Tregs)の主制御遺伝子であるFOXP3のsplicing variants発現量が喘息患者で対照に比べ変化していることを報告した。一方、T細胞受容体刺激によるTregsのカルシウム不応答性を利用し、Tregsの機能解析も行ってきた。
喘息患者では、Tregsの機能異常を認め、そのため炎症の慢性化をきたしていることが推測されたため、FOXP3 variants発現量の変化がその機能異常と相関するかどうかを検討した。各variantsのHalo-tag constructsを作製し、細胞に最適なトランスフェクション条件を選定した。さらに、特徴的なターゲット遺伝子群の発現量をreal-time PCRにより解析し、カルシウム応答性についても検討した。
抑制機能の一端を担うと考えられているcAMPの産生量を測定したところ、全長FOXP3(FL)とexson2欠損体(delta2)では、delta2の方が高産生量を示していた。Tregsの機能と相関があるカルシウム応答性に関しては、FLとdelta2との間に差異は認められなかった。
Exson2が欠損していてもFOXP3の機能に問題は生じていないと考えられたが、Th17細胞の主制御遺伝子であるRORgtの発現量が亢進していた。喘息患者(成人)においてdelta2/FL比が高くなることより、TregsからTh17へのシフトがvariantsの発現量によりコントロールされているかもしれないことが示唆された。

研究成果

• [国際共同研究] University of Oxford(United Kingdom)
• [国際共同研究] CNIO(Spain)
• [雑誌論文] Tyrphostin AG-related compounds attenuate H2O2-induced TRPM2-dependent and -independent cellular responses. (2017)
  • 著者名/発表者名: Shinichiro Yamamoto, Takahiro Toda, Ryo Yonezawa, Takaharu Negoro, Shunichi Shimizu
  • 雑誌名: Journal of Pharmacological Sciences 巻: in press 号: 1 ページ: 68-74
  • DOI: 10.1016/j.jphs.2017.05.001
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Higher Adiponectin expression suppresses neointimal hyperplasia by attenuating the inflammatory response following acceleration of endothelialization in damaged areas in adiponectin transgenic mice (2017)
  • 著者名/発表者名: Omori Y, Suzuki H, Saito K, Shoji M, ISO Y, Negoro T, Koba S, Nakano Y, Kobayashi Y
  • 雑誌名: Showa Univ. J. Med. Sci. 巻: 29 ページ: 107-117
  • NAID: 130006100252
  • 査読あり
• [雑誌論文] Suppressive Effects of Glucose-Dependent Insulinotropic Polypeptide on Cardiac Hypertrophy and Fibrosis in Angiotensin II-Infused Mouse Models (2016)
  • 著者名/発表者名: Hiromura M., Mori Y., Kohashi K., Terasaki M., Shinmura K., Negoro T., Kawashima H., Kogure M., Wachi T., Watanabe R., Sato K., Kushima H., Tomoyasu M., Nakano Y., Yamada Y., Watanabe T. and Hirano T.
  • 雑誌名: Circulation Journal 巻: 80 号: 9 ページ: 1988-1997
  • DOI: 10.1253/circj.CJ-16-0152
  • NAID: 130005406847
  • ISSN: 1346-9843, 1347-4820
  • 査読あり
• [雑誌論文] The TAR-RNA binding protein is required for immunoresponses triggered by Cardiovirus infection (2016)
  • 著者名/発表者名: Komuro A., Homma Y., Negoro T., Barber G.N. and Horvath C.M.
  • 雑誌名: Biochemical and Biophysical Research Communications 巻: 480 号: 2 ページ: 187-193
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2016.10.023
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] TRPM2 channels in alveolar epithelial cells mediate bleomycin-induced lung inflammation (2016)
  • 著者名/発表者名: Yonezawa R, Yamamoto S, Takenaka M, Kage Y, Negoro T, Toda T, Ohbayashi M, Numata T, Nakano Y, Yamamoto T, Mori Y, Ishii M, Shimizu S
  • 雑誌名: Free Radic Biol Med 巻: 90 ページ: 101-113
  • DOI: 10.1016/j.freeradbiomed.2015.11.021
  • 査読あり
• [雑誌論文] Sensitization of H2O2-induced TRPM2 activation and subsequent interleukin-8 (CXCL8) production by intracellular Fe2+ in human monocytic U937 cells. (2015)
  • 著者名/発表者名: Shimizu S, Yonezawa R, Negoro T, Yamamoto S, Numata T, Ishii M, Mori Y, Toda T.
  • 雑誌名: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology 巻: 68 ページ: 119-127
  • DOI: 10.1016/j.biocel.2015.09.005
  • 査読あり
• [学会発表] 経口免疫寛容誘導時における減感作状態のEXiLE法を用いた評価 (2018)
  • 著者名/発表者名: 秋山晴代、西村光平、中村亮介、堀雅之、甲斐茂美、松藤寛、根来孝治、宮澤眞紀、松原康策
  • 学会等名: 日本薬学会第138年会
• [学会発表] 喘息患者における各FOXP3バリアント発現とその機能との関係 (2017)
  • 著者名/発表者名: 山本佳樹、根来孝治、成島道昭、秋山 晴代、清水 俊一、山本 伸一郎、戸田 雄大、高柳隆章、板橋稼頭央
  • 学会等名: 第66回日本アレルギー学会学術大会
• [学会発表] 舌下免疫療法実施時における血清中中和抗体活性のin vitro評価法の開発 (2017)
  • 著者名/発表者名: 秋山晴代、中村亮介、櫻井大樹、平野吉彬、根来孝治、岡本美孝
  • 学会等名: 第66回日本アレルギー学会学術大会
• [学会発表] Involvement of RNAi accessory factors in MDA5/LGP2-mediated cellular responses by Cardiovirus infection (2016)
  • 著者名/発表者名: Komuro Akihikko, Negoro Takaharu, Barber Glen, Horvath Curt
  • 学会等名: 第45回日本免疫学会学術総会
  • 発表場所: 沖縄コンベンションセンター（沖縄）
  • 年月日: 2016-12-05
• [学会発表] アディポネクチンアンチセンス、センストランスジェニックマウスの表現型解析 (2016)
  • 著者名/発表者名: 中野泰子、秋山晴代、目加田和之、若菜茂晴、齊藤清美、巖本三壽、吉木淳、根来孝治
  • 学会等名: 第89回日本生化学会大会
  • 発表場所: 仙台国際センター（仙台）
  • 年月日: 2016-09-25
• [学会発表] 喘息患者における各FOXP3バリアント発現とその機能との関係 (2016)
  • 著者名/発表者名: 山本佳樹、根来孝治、成島道昭、秋山 晴代、清水 俊一、山本 伸一郎、戸田 雄大、高柳隆章、板橋稼頭央
  • 学会等名: 第65回日本アレルギー学会学術大会
  • 発表場所: 東京国際フォーラム（東京都）
  • 年月日: 2016-06-17
• [学会発表] CD4+CD25high T細胞の小児期における表面抗原解析と喘息患者における参加ストレス応答の検討 (2016)
  • 著者名/発表者名: 山本 佳樹、成島 道昭、根来 孝治、高柳 隆章、板橋 稼頭央
  • 学会等名: 第65回日本アレルギー学会学術大会
  • 発表場所: 東京国際フォーラム
  • 年月日: 2016-06-17
• [備考] 医薬品機能教育研究部門薬物治療学ユニット
  • URL: http://pharm.thu.ac.jp/research/unit/yakubutsuchiryougaku.html