免疫不全症への造血幹細胞遺伝子治療における新規エンベロープによる幹細胞性の維持

• 研究課題/領域番号: 15K09676
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 小児科学
• 研究機関: 国立研究開発法人国立成育医療研究センター
• 研究代表者: 内山 徹 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 成育遺伝研究部, 室長 (10436107)
• 研究協力者: 峰岸 知子 ; 秋葉 由美
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2017年度)
• 配分額: 4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円); 2017年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円); 2016年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円); 2015年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
• キーワード: レンチウイルスベクター / 造血幹細胞遺伝子治療 / 幹細胞性 / ヒヒ内在性レトロウイルス / 遺伝子治療 / BaEV / ヒト造血幹細胞 / baboon envelope / 安定ウイルス産生細胞株 / ウイルス安定産生細胞株

研究成果の概要

本研究では、細胞毒性を示さないヒヒ内在性レトロウイルスのエンベロープ（BaEV env）を用いて、レンチウイルス（LV）ベクターのパッケージング細胞の作製を行った。まず、LVの構成遺伝子gag-polと制御遺伝子revを293T細胞に導入し、293LVgpr細胞を作製した。この細胞はベクターおよびエンベローププラスミドをトランスフェクションすることでLVベクターの産生が可能であった。次に、この細胞にBaEV envを導入し、パッケージング細胞を作製したが、十分な力価のウイルスは産生されなかった。原因としてBaEV envの発現が低いことが判明し、現在BaEVのコピー数の上昇を試みている。

研究成果

• [雑誌論文] Somatic MECOM mosaicism in a patient with congenital bone marrow failure without a radial abnormality (2018)
  • 著者名/発表者名: Osumi Tomoo、Tsujimoto Shin-ichi、Nakabayashi Kazuhiko、Taniguchi Maki、Shirai Ryota、Yoshida Masanori、Uchiyama Toru、Nagasawa Junko、Goyama Susumu、Yoshioka Takako、Tomizawa Daisuke、Kurokawa Mineo、Matsubara Yoichi、Kiyokawa Nobutaka、Matsumoto Kimikazu、Hata Kenichiro、Kato Motohiro
  • 雑誌名: Pediatric Blood & Cancer 巻: 65 号: 6
  • DOI: 10.1002/pbc.26959
  • 査読あり
• [雑誌論文] Fecal calprotectin rise in chronic granulomatous disease. (2017)
  • 著者名/発表者名: Nakazawa Y, Kawai T, Arai K, Tamura E, Uchiyama T, Onodera M
  • 雑誌名: J. Clin. Immunol. 巻: 37 ページ: 741-743
  • 査読あり
• [雑誌論文] ingle cell-based vector tracing in patients with ADA-SCID treated with stem cell gene therapy. (2017)
  • 著者名/発表者名: Igarashi Y, Uchiyama T, Minegishi T, Takahashi S, Watanabe N, Kawai T, Yamada M, Ariga T, Onodera M
  • 雑誌名: Mol. Ther. Methods. Clin. Dev 巻: 6 ページ: 8-16
  • DOI: 10.1016/j.omtm.2017.05.005
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Persistent Impairment of T-Cell Regeneration in a Patient with Activated PI3K δ Syndrome (2017)
  • 著者名/発表者名: Goto F, Uchiyama T, Nakazawa Y, Imai K, Kawai T, Onodera M
  • 雑誌名: J Clin Immunol 巻: 37 号: 4 ページ: 347-350
  • DOI: 10.1007/s10875-017-0393-7
  • 査読あり
• [雑誌論文] Blastic transformation of juvenile myelomonocytic leukemia caused by the copy number gain of oncogenic KRAS. (2017)
  • 著者名/発表者名: Osumi T, Kato M, Ouchi-Uchiyama M, Tomizawa D, Kataoka K, Fujii Y, Seki M, Takita J, Ogawa S, Uchiyama T, Ohki K, Kiyokawa N.
  • 雑誌名: Pediatr Blood Cancer. Pediatr Blood Cancer. 巻: 64(9) 号: 9
  • DOI: 10.1002/pbc.26496
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] The long terminal repeat negative control region is a critical element for insertion oncogenesis after gene transfer into hematopoietic progenys with Moloney murine leukemia viral vectors. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ikawa Y, Uchiyama T, Jagadeesh GJ, Candotti F
  • 雑誌名: Gene therapy 巻: 23 号: 11 ページ: 815-818
  • DOI: 10.1038/gt.2016.51
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Effects of enzyme replacement therapy on immune function in ADA deficiency patient (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakazawa Y, Kawai T, Uchiyama T, Goto F, Watanabe N, Maekawa T, Ishigro A, Okuyama, T, Otsu M, Yamada M, Hershfield MS, Ariga T, Onodera M
  • 雑誌名: Clinical Immunology 巻: 161 号: 2 ページ: 391-393
  • DOI: 10.1016/j.clim.2015.06.011
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Severe and Rapid Progression in Very Early-Onset Chronic Granulomatous Disease-Associated Colitis. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kawai T, Arai K, Harayama S, Nakazawa Y, Goto F, Maekawa T, Tamura E, Uchiyama T, Onodera M
  • 雑誌名: Journal if Clinical Immunology 巻: 35 号: 6 ページ: 583-588
  • DOI: 10.1007/s10875-015-0180-2
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [学会発表] Current status of hematopoietic stem cell gene therapy for Wiskott-Aldrich syndrome in Japan. (2017)
  • 著者名/発表者名: Toru Uchiyama
  • 学会等名: The 7th International Collaboration Forum of Human Gene Therapy for Genetic Disease.
  • 招待講演
• [学会発表] デノシンデアミナーゼ欠損症の従姉弟例 (2017)
  • 著者名/発表者名: 内山 徹
  • 学会等名: 第10回日本免疫不全症研究会
• [学会発表] Progress in gene therapy for primary immunodeficiencies (2017)
  • 著者名/発表者名: 内山 徹
  • 学会等名: 第23回日本遺伝子細胞治療学会
  • 招待講演
• [学会発表] Current status of hematopoietic stem cell gene therapy for Wiskott-Aldrich syndrome in Japan (2017)
  • 著者名/発表者名: Uchiyama T
  • 学会等名: The 7th International Collaboration Forum of Human Gene Therapy for Genetic Disease
  • 発表場所: 東京
  • 招待講演
• [学会発表] Selective pressure of vector-derived ADA in ADA-SCID patients treated with gene therapy (2016)
  • 著者名/発表者名: 内山徹、五十嵐友香、渡辺信之、高橋シリラット、中澤裕美子、河合利尚、後藤文洋、山田雅文、有賀正、小野寺雅史
  • 学会等名: 第78回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2016-10-13
• [学会発表] 重症複合免疫不全症（SCID）の新生児スクリーニング (2016)
  • 著者名/発表者名: 後藤文洋、長田香代、峰岸知子、諸田沙織、中島英規、奥山虎之、河合利尚、小野寺雅史、内山徹
  • 学会等名: 第４３回日本マススクリーニング学会
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 2016-08-26
• [学会発表] Hematopoietic stem cell gene therapy for Wiskott-Aldrich syndrome (2016)
  • 著者名/発表者名: Uchiyama T
  • 学会等名: 第22回日本遺伝子治療学会学術集会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2016-07-28
  • 招待講演
• [学会発表] Single cell-based vector tracing in the patients treated with stem cell gene therapy (2016)
  • 著者名/発表者名: Takahashi S, Igarashi Y, Uchiyama T, Onodera M.
  • 学会等名: 第22回日本遺伝子治療学会学術集会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2016-07-28
• [学会発表] Hematopoietic stem cell gene therapy for Wiskott-Aldrich syndrome (2016)
  • 著者名/発表者名: Toru Uchiyama, Satoshi Horino, Tkanori So, G Jayashree Jagadeesh, Naoto Ishii, Fabio Candotti
  • 学会等名: Japan Society of Gene and Cell Therapy, 22nd Annual Meeting
  • 発表場所: Tokyo
  • 年月日: 2016-07-28
  • 招待講演
• [学会発表] 乾燥ろ紙血を用いた原発性免疫不全症の新生児マススクリーニングパイロット研究 (2016)
  • 著者名/発表者名: 河合利尚、内山徹、後藤文洋、中澤裕美子、小須賀基通、和田友香、塚本桂子、伊藤裕司、奥山虎之、小野寺雅史
  • 学会等名: 第119回小児科学会学術集会
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 2016-05-13
• [学会発表] Rapamycin controls lymph proliferation and restores functional T cells in Activated PI3Kd syndrome (2015)
  • 著者名/発表者名: Uchiyama T
  • 学会等名: 第77回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 金沢
  • 年月日: 2015-10-16
• [学会発表] A novel tracking system of transgene using droplet-based single cell PCR in hematopoietic stem cell gene therapy (2015)
  • 著者名/発表者名: Igarashi Y, Uchiyama T, Wanatabe N, Nakazawa Y, Otsu M, Ariga T, Onodera M
  • 学会等名: European Society of Gene and Cell Therapy and Finnish Society of Gene therapy Collaborative Congress
  • 発表場所: Helsinki, Finland
  • 年月日: 2015-09-17
  • 国際学会
• [学会発表] Influence of virus production methods on genotoxic potential of gene transfer vectors (2015)
  • 著者名/発表者名: Takahashi S, Uchiyama T, Onodera M
  • 学会等名: Japan Society of Gene Therapy, 21th Annual Meeting
  • 発表場所: Osaka
  • 年月日: 2015-07-24
• [学会発表] Regulatory science of viral vector for gene therapy (2015)
  • 著者名/発表者名: Igarashi Y, Uchiyama T, Uchida E, Onodera M
  • 学会等名: Japan Society of Gene Therapy, 21th Annual Meeting
  • 発表場所: Osaka
  • 年月日: 2015-07-24
• [図書] 小児内科 (2017)
  • 著者名/発表者名: 内山徹
  • 総ページ数: 4
  • 出版者: 東京医学社
• [図書] 先端治療技術の実用化と開発戦略 (2017)
  • 著者名/発表者名: 内山徹
  • 総ページ数: 7
  • 出版者: 技術情報協会
  • ISBN: 9784861046506