Leydig幹細胞の試験管内増幅技術の確立

• 研究課題/領域番号: 15K15013
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 解剖学一般(含組織学・発生学)
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 篠原 美都 京都大学, 医学研究科, 助教 (10372591)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2017年度)
• 配分額: 3,640千円 (直接経費: 2,800千円、間接経費: 840千円); 2017年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円); 2016年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2015年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
• キーワード: 幹細胞 / 生殖 / 精子 / 精巣 / ライディッヒ細胞 / Leydig細胞

研究成果の概要

近年生殖細胞だけでなくLeydig細胞も幹細胞システムから成ることが明らかになった。本研究ではLeydig幹細胞を試験管内で増幅する長期培養系の確立を目指した。Leydig 幹細胞を濃縮するためHoechst 色素の排出能に基づくside population (SP)分画を無血清培地にて培養したところ、２週間後にLeydig細胞マーカーPDGFRAの発現が一部に認められた。野生型マウス精巣の間質に、培養細胞（Green マウス由来）を注入し３ヶ月後にUV照射にて観察したところ、間質にEGFPを発現する細胞の生着が認められたが、Leydig 細胞マーカーPDGFRA発現は認められなかった。

研究成果

• [雑誌論文] In vivo genetic manipulateon of spermatogonial stem cells and their microenvironment by adeno-associated viruses. (2018)
  • 著者名/発表者名: Watanabe S., Kanatsu-Shinohara, M., Ogonuki N., Matoba S., Ogura A., Shinohara T.
  • 雑誌名: Stem Cell Reports 巻: S2213-6711 (18) 号: 5 ページ: 30132-2
  • DOI: 10.1016/j.stemcr.2018.03.005
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Nonrandom contribution of left and right testes to germline transmission from mouse spermatogonial stem cells. (2017)
  • 著者名/発表者名: Kanatsu-Shinohara, M., Naoki, N., and Shinohara, T.
  • 雑誌名: Biol. Reprod. 巻: 92(6) ページ: 902-910
  • 査読あり
• [雑誌論文] Transfer of a mouse artificial chromosome into spermatogonial stem cells genetates transchromosomic mice, (2017)
  • 著者名/発表者名: Shinohara T, Kazuki K, Ogonuki N, Morimoto H, Matoba S, Hiramatsu K, Honma K, Suzuki T, Hara T, Ogura A, Oshimura M, Kanatsu-Shinohara M, Kazuki Y.
  • 雑誌名: Stem Cell Reports. 巻: 9(4) 号: 4 ページ: 1180-1191
  • DOI: 10.1016/j.stemcr.2017.08.012
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Myc/Mycn-mediated glycolysis enhances mouse spermatogonial stem cell self-renewal. (2016)
  • 著者名/発表者名: Kanatsu-Shinohara M., Tanaka T., Ogonuki N., Ogura A., Morimoto H., Cheng PF., Eisenman RN., Trumpp A., Shinohara T.
  • 雑誌名: Genes Dev. 巻: 30(23) 号: 23 ページ: 2637-2648
  • DOI: 10.1101/gad.287045.116
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] The luteinizing hormone-testosterone pathway regulates mouse spermatogonial stem cell self-renewal by suppressing WNT5A expression in Sertoli cells. (2016)
  • 著者名/発表者名: Tanaka T., Kanatsu-Shinohara M., Lei Z., Rao CV., Shinohara T.
  • 雑誌名: Stem Cell Reports 巻: 7(2) 号: 2 ページ: 279-291
  • DOI: 10.1016/j.stemcr.2016.07.005
  • NAID: 120005825924
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Nonrandom germline transmission of mouse spermatogonial stem cells. (2016)
  • 著者名/発表者名: Kanatsu-Shinohara M., Naoki H., Shinohara T.
  • 雑誌名: Dev Cell 巻: 38 (3) 号: 3 ページ: 248-261
  • DOI: 10.1016/j.devcel.2016.07.011
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Fertility of male germline stem cells following spermatogonial transplantation in infertile mouse models. (2016)
  • 著者名/発表者名: Kanatsu-Shinohara M., Morimoto H., Shinohara T.
  • 雑誌名: Biol Reprod. 巻: 94(5) 号: 5 ページ: 112-112
  • DOI: 10.1095/biolreprod.115.137869
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Enrichment of Mouse Spermatogonial Stem Cells by the Stem Cell Dye CDy1. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kanatsu-Shinohara M, Morimoto H, Shinohara T.
  • 雑誌名: Biology of reproduction 巻: 94 (1) 13 号: 1 ページ: 1-10
  • DOI: 10.1095/biolreprod.115.135707
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Pluripotent cell derivation from male germline cells by suppression of <i>Dmrt1</i> and <i>Trp53</i> (2015)
  • 著者名/発表者名: Tanaka, T., Kanatsu-Shinohara, M., Hirose, M., Ogura, A., Shinohara, T.
  • 雑誌名: Journal of Reproduction and Development 巻: 61 号: 5 ページ: 473-484
  • DOI: 10.1262/jrd.2015-059
  • NAID: 130005104118
  • ISSN: 0916-8818, 1348-4400
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] The CDKN1B-RB1-E2F1 pathway protects mouse spermatogonial stem cells from genomic damage (2015)
  • 著者名/発表者名: Tanaka, T., Kanatsu-Shinohara, M., Shinohara, T.
  • 雑誌名: Journal of Reproduction and Development 巻: 61 号: 4 ページ: 305-316
  • DOI: 10.1262/jrd.2015-027
  • NAID: 130005094647
  • ISSN: 0916-8818, 1348-4400
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] ROS-Generating Oxidase Nox3 Regulates the Self-Renewal of Mouse Spermatogonial Stem Cells (2015)
  • 著者名/発表者名: Morimoto H, Kanatsu-Shinohara M, Shinohara T.
  • 雑誌名: Biology of reproduction 巻: 92 (6) 147 号: 6 ページ: 1-10
  • DOI: 10.1095/biolreprod.114.127647
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [学会発表] 精子幹細胞の寿命と精子形成への寄与の動態解明 (2017)
  • 著者名/発表者名: 篠原美都
  • 学会等名: JST 戦略的創造研究推進事業（さきがけ）第10回「細胞機能の構成的な理解と制御」領域会議
  • 発表場所: 淡路夢舞台国際会議場
  • 年月日: 2017-02-21
• [学会発表] 精子幹細胞の寿命と精子形成への寄与の動態解明 (2017)
  • 著者名/発表者名: 篠原美都
  • 学会等名: 生命動態システム科学四拠点 合同シンポジウム
  • 招待講演
• [学会発表] 精子幹細胞の寿命制御とアンチエイジング機構 (2017)
  • 著者名/発表者名: 篠原美都
  • 学会等名: 第７回細胞再生医療研究会
  • 招待講演
• [学会発表] 精子幹細胞の寿命と精子形成への寄与の動態解明 (2016)
  • 著者名/発表者名: 篠原美都
  • 学会等名: JST 戦略的創造研究推進事業（さきがけ）H25年度採択（第三期）研究成果報告会 「細胞機能の構成的な理解と制御」
  • 発表場所: 東京大学・理学部化学講堂
  • 年月日: 2016-11-01
• [学会発表] 長期培養系を用いた精子幹細胞の老化メカニズムの解明 (2016)
  • 著者名/発表者名: 篠原美都
  • 学会等名: 新学術領域「幹細胞老化と疾患」第三回領域会議
  • 発表場所: 東京大学 伊藤国際学術研究センター
  • 年月日: 2016-06-28
• [学会発表] 精子幹細胞の寿命と精子形成への寄与の動態解明 (2016)
  • 著者名/発表者名: 篠原美都
  • 学会等名: JST 戦略的創造研究推進事業（さきがけ）第9回「細胞機能の構成的な理解と制御」領域会議
  • 発表場所: 福岡県福岡市 ホテル ザ・ルイガンズ
  • 年月日: 2016-06-21
• [学会発表] Nonrandom germline transmission of mouse spermatogonial stem cells (2016)
  • 著者名/発表者名: Takashi Shinohara, Honda Naoki, and Mito Kanatsu-Shinohara
  • 学会等名: 文部科学省 科学研究費補助金 新学術領域研究 「生殖細胞のエピゲノムダイナミクスとその制御」による国際シンポジウムEpigenome Dynamics and Regulation in Germ cells
  • 発表場所: Clock Tower Centennial Hall, Kyoto University
  • 年月日: 2016-02-17
  • 国際学会
• [学会発表] Enrichment of mouse spermatogonial stem cells by a stem cell dye CDy1 (2016)
  • 著者名/発表者名: Mito Kanatsu-Shinohara, Hiroko Morimoto, and Takashi Shinohara
  • 学会等名: 文部科学省 科学研究費補助金 新学術領域研究 「生殖細胞のエピゲノムダイナミクスとその制御」による国際シンポジウム Epigenome Dynamics and Regulation in Germ cells
  • 発表場所: Clock Tower Centennial Hall, Kyoto University
  • 年月日: 2016-02-17
  • 国際学会
• [学会発表] 精子幹細胞の寿命と精子形成への寄与の動態解明 (2015)
  • 著者名/発表者名: 篠原美都
  • 学会等名: JST 戦略的創造研究推進事業（さきがけ）第8回「細胞機能の構成的な理解と制御」領域会議
  • 発表場所: 東京白金台・八芳園
  • 年月日: 2015-11-26
• [学会発表] 精子幹細胞の寿命と精子形成への寄与の動態解明 (2015)
  • 著者名/発表者名: 篠原美都
  • 学会等名: JST 戦略的創造研究推進事業（さきがけ）H24年度採択（第二期）研究成果報告会「細胞機能の構成的な理解と制御」
  • 発表場所: 東京大学・伊藤謝恩ホール
  • 年月日: 2015-11-25
• [学会発表] 精子幹細胞の寿命と精子形成への寄与の動態解明 (2015)
  • 著者名/発表者名: 篠原美都
  • 学会等名: JST 戦略的創造研究推進事業（さきがけ）第7回「細胞機能の構成的な理解と制御」領域会議
  • 発表場所: IBM天城ホームステッド
  • 年月日: 2015-07-14
• [学会発表] 長期培養系を用いた精子幹細胞の老化メカニズムの解明 (2015)
  • 著者名/発表者名: 篠原美都
  • 学会等名: 新学術領域「幹細胞老化と疾患」第二回領域会議
  • 発表場所: 新潟グランドホテル
  • 年月日: 2015-06-19
• [図書] 実験医学 特集 「再発見！MYCの多機能性-グローバル転写因子として見直される古典的がん遺伝子」 (2018)
  • 著者名/発表者名: 田中敬・篠原美都・篠原隆司
  • 総ページ数: 6
  • 出版者: 羊土社
  • ISBN: 9784758125055
• [図書] 実験医学 特集 「臓器老化の本質に迫るステムセルエイジング：幹細胞の変遷と加齢関連疾患のメカニズム」 (2017)
  • 著者名/発表者名: 篠原美都・本田直樹・篠原隆司
  • 総ページ数: 6
  • 出版者: 羊土社
  • ISBN: 9784758101639