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蛍光を発する非天然アミノ酸スキャンによる膜タンパク質の状況依存的構造変化の解析

研究課題

研究課題/領域番号 15K15036
研究種目

挑戦的萌芽研究

配分区分基金
研究分野 生理学一般
研究機関生理学研究所

研究代表者

久保 義弘  生理学研究所, 分子細胞生理研究領域, 教授 (80211887)

研究協力者 Tsari Andriani Rizki  生理学研究所, 分子細胞生理研究領域, 大学院生
研究期間 (年度) 2015-04-01 – 2017-03-31
研究課題ステータス 完了 (2016年度)
配分額 *注記
3,640千円 (直接経費: 2,800千円、間接経費: 840千円)
2016年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
2015年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
キーワード蛍光非天然アミノ酸 / P2X2 / ATP受容体チャネル / 動的構造変化 / ATP受容体 / イオンチャネル / 非天然蛍光アミノ酸 / 光学解析
研究成果の概要

本研究では、まず、蛍光非天然アミノ酸 (fUAA) を膜タンパク質に組み込みその強度変化から構造変化を検出する研究手法の種々の条件を最適化し、次にATP受容体チャネルP2X2を対象として実験を行い以下の知見を得た。(1) ATP投与による活性化時に、様々な部域に導入したfUAAの蛍光強度の変化が観察されグローバルな構造変化が示唆された。(2) 第1膜貫通部位のSer54にfUAAを導入した場合、ATP投与による電流の活性化より蛍光強度の変化は緩徐で、ポアの経時的拡大等の2次的構造変化が示唆された。(3) 膜電位依存的活性化に伴うfUAAの蛍光強度の変化は第2膜貫通部位のT339で観察された。

報告書

(3件)
  • 2016 実績報告書   研究成果報告書 ( PDF )
  • 2015 実施状況報告書
  • 研究成果

    (3件)

すべて 2017 2016 2015

すべて 学会発表 (3件)

  • [学会発表] Voltage-clamp fluorometry analyses of the secondary structural rearrangements of ATP-gated P2X2 receptor2017

    • 著者名/発表者名
      Andriani RT, Kubo Y
    • 学会等名
      第94回日本生理学会大会
    • 発表場所
      静岡県、浜松市、アクトシティ浜松
    • 年月日
      2017-03-28
    • 関連する報告書
      2016 実績報告書
  • [学会発表] Analyses of structural rearrangements of P2X2 by voltage-clamp fluorometry using fluorescent unnatural amino acid2016

    • 著者名/発表者名
      Andriani Rizki Tsari, Kubo Yoshihiro
    • 学会等名
      第93回日本生理学会大会
    • 発表場所
      札幌コンベンションセンター(北海道、札幌市)
    • 年月日
      2016-03-22
    • 関連する報告書
      2015 実施状況報告書
  • [学会発表] Signal transmission within the P2X2 trimeric receptor and the voltage dependent structural rearrangements2015

    • 著者名/発表者名
      Yoshihiro Kubo
    • 学会等名
      The 5th International Ion Channel Conference
    • 発表場所
      Luzhou Convention Center (Luzhou, China)
    • 年月日
      2015-06-29
    • 関連する報告書
      2015 実施状況報告書

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公開日: 2015-04-16   更新日: 2018-03-22  

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