逆転写過程の無細胞再構築

• 研究課題/領域番号: 15K15139
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: ウイルス学
• 研究機関: 東京医科歯科大学
• 研究代表者: 増田 貴夫 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 准教授 (80219336)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2017-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2016年度)
• 配分額: 3,770千円 (直接経費: 2,900千円、間接経費: 870千円); 2016年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2015年度: 2,340千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 540千円)
• キーワード: 逆転写 / 逆転写酵素 / レトロウイルス / RNA / HIV / RNaseH / 転写

研究成果の概要

ヒト免疫不全ウイルスイルス（HIV）の複製に必須な逆転写過程をリコンビナント逆転写酵素蛋白およびin vitro 合成ウイルスRNAを用い、無細胞条件下での逆転写再構築アッセイ系の樹立に成功した。このアッセイ系を用いて、(1)HIV RNAの5’末端のグアニン（G）の数が、1stストランド転移に重要であること(2)HIVは、逆転写反応において最も効率の良い鋳型RNAである5'-端にGを一つ有するRNAをウイルス粒子に選択的にパッケージングすることを世界に先駆けて見出した。本研究結果は、HIV逆転写制御に関与する新規の分子基盤とウイルスゲノムの転写機構との共進化を示唆する新規知見を提示した。

研究成果

• [雑誌論文] Critical Contribution of Tyr15 in the HIV-1 Integrase (IN) in Facilitating IN Assembly and Nonenzymatic Function through the IN Precursor Form with Reverse Transcriptase. (2017)
  • 著者名/発表者名: Takahata T, Takeda E, Tobiume M, Tokunaga K, Yokoyama M, Huang YL, Hasegawa A, Shioda T, Sato H, Kannagi M, Masuda T.
  • 雑誌名: J Virol 巻: 91 号: 1
  • DOI: 10.1128/jvi.02003-16
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Natural Single-Nucleotide Variations in the HIV-1 Genomic SA1prox Region Can Alter Viral Replication Ability by Regulating Vif Expression Levels (2016)
  • 著者名/発表者名: Nomaguchi M, Doi N, Sakai Y, Ode H, Iwatani Y, Ueno T, Matsumoto Y, Miyazaki Y, Masuda T, and Adachi A
  • 雑誌名: Journal of Virology 巻: 90 号: 9 ページ: 4563-4578
  • DOI: 10.1128/jvi.02939-15
  • 査読あり
• [雑誌論文] Fate of HIV-1 cDNA intermediates during reverse transcription is dictated by transcription initiation site of virus genomic RNA. (2015)
  • 著者名/発表者名: Masuda T, Sato Y, Huang Y, Koi S, Takahata T, Hasegawa A, Kawai G, Kannagi M.
  • 雑誌名: Fate of HIV-1 cDNA intermediates during reverse transcription is dictated by transcription initiation site of virus genomic RNA. 巻: 5 号: 1 ページ: 17680-17680
  • DOI: 10.1038/srep17680
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [学会発表] Role of 5’-end modification of HIV-1 RNA during reverse transcription (2016)
  • 著者名/発表者名: Yu-Lun Huang, Tatsuro Takahata、Atsuhiko Hasegawa, Gota Kawai Mari Kannagi and Takao Masuda
  • 学会等名: 第64回 日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 札幌 （札幌コンベンションセンター）
  • 年月日: 2016-10-23
• [学会発表] HIV-1 RNA 5’ 末端配列の逆転写過程での重要性. (2015)
  • 著者名/発表者名: 増田貴夫、佐藤洋子、黄渝倫、高畑辰郎、長谷川温彦、河合剛汰、神奈木真理.
  • 学会等名: 第29回 日本エイズ学会学術集会
  • 発表場所: 東京ドームホテル、東京
  • 年月日: 2015-11-30
• [学会発表] In vitro reconstitution of HIV-1 reverse transcription revealed an unprecedented role of 5f virus genomic RNA.or reverse transcription. (2015)
  • 著者名/発表者名: Masuda T, Sato Y, Huang Y, Koi S, Takahata T, Hasegawa A, Kawai G, Kannagi M.
  • 学会等名: 第63回 日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 福岡国際会議場、福岡
  • 年月日: 2015-11-22