CRISPR/CAS9を用いた子宮筋腫発生モデルの開発

• 研究課題/領域番号: 15K15610
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 産婦人科学
• 研究機関: 慶應義塾大学
• 研究代表者: 丸山 哲夫 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 准教授 (10209702)
• 研究分担者: 内田 浩 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 講師 (90286534) ; 升田 博隆 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 講師 (80317198) ; 小野 政徳 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 共同研究員 (70348712) ; 荒瀬 透 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 共同研究員 (20348709)
• 研究協力者: 高尾 知佳 慶應義塾大学, 医学部, 特任助教 (40612429)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2017-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2016年度)
• 配分額: 3,640千円 (直接経費: 2,800千円、間接経費: 840千円); 2016年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2015年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
• キーワード: 子宮筋腫 / MED12 / CRISPR/CAS9 / 生殖医学 / 幹細胞医学 / 脱細胞化 / 再細胞化

研究成果の概要

正常子宮平滑筋組織から分離した子宮平滑筋細胞には、分離直後は幹様細胞が多く存在するが、その後培養を続けると幹様細胞は激減した。そこで、幹様細胞ではなく正常子宮平滑筋細胞に対して、CRISPR/CAS9システムを用いて子宮筋腫の約70％に存在するMED12変異の導入を試みたところ、MED12変異導入細胞が得られた。これを用いて子宮筋腫に特徴的なホルモン依存性の細胞増殖とコラーゲン発現について調べた。MED12変異導入細胞では野生型と比較して増殖に影響はなかったが、変異及びホルモン依存的にコラーゲン発現の増加傾向が認められた。現在in vivo子宮筋腫モデルの作製を進めている。

研究成果

• [国際共同研究] ノースウエスタン大学医学部(米国)
• [雑誌論文] Impact of borderline-subclinical hypothyroidism on subsequent pregnancy outcome in women with unexplained recurrent pregnancy loss. (2017)
  • 著者名/発表者名: Uchida S, Maruyama T, Kagami M, Miki F, Hihara H, Katakura S, Yoshimasa Y, Masuda H, Uchida H, Tanaka M
  • 雑誌名: J Obstet Gynaecol Res. 巻: -
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Contributions of system A subtypes to α-methylaminoisobutyric acid uptake by placental microvillous membranes of human and rat. (2017)
  • 著者名/発表者名: Takahashi Y, Nishimura T, Maruyama T, Tomi M, Nakashima E
  • 雑誌名: Amino Acids. 巻: 49 号: 4 ページ: 795-803
  • DOI: 10.1007/s00726-017-2384-7
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Debris makes “MR DC” hustle on endometriosis. (2017)
  • 著者名/発表者名: Maruyama T
  • 雑誌名: Fertil Steril. 巻: 107 号: 1 ページ: 68-68
  • DOI: 10.1016/j.fertnstert.2016.10.014
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] 産婦人科領域における再生医学・再生医療の現状． (2017)
  • 著者名/発表者名: 丸山哲夫
  • 雑誌名: 臨床婦人科産科 巻: 71 ページ: 268-272
  • NAID: 40021116711
• [雑誌論文] Cytogenetic analysis of spontaneously discharged products of conception by array-based comparative genomic hybridization. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ozawa N, Sago H, Matsuoka K, Maruyama T, Migita O, Aizu Y, Inazawa J
  • 雑誌名: SpringerPlus. 巻: 5 号: 1 ページ: 874-874
  • DOI: 10.1186/s40064-016-2594-6
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Bioengineered uterine tissue supports a pregnancy in a rat model. (2016)
  • 著者名/発表者名: Hellstrom M, Moreno-Moya JM, Bandstein S, Bom E, Akouri RR, Miyazaki K, Maruyama T, Brannstrom M
  • 雑誌名: Fertil Steril. 巻: 106 号: 2 ページ: 487-496
  • DOI: 10.1016/j.fertnstert.2016.03.048
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] How to create an embryo penetration route. (2016)
  • 著者名/発表者名: Uchida H, Maruyama T, Masuda H, Uchida S, Miki F, Hihara H, Katakura S, Yoshimasa Y, Tanaka M
  • 雑誌名: Am J Reprod Immunol. 巻: 75 号: 3 ページ: 326-332
  • DOI: 10.1111/aji.12476
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Endometrial side population cells: potential adult stem/progenitor cells in endometrium. (2015)
  • 著者名/発表者名: Masuda H, Maruyama T, Gargett C, Miyazaki K, Matsuzaki Y, Okano H, Tanaka M
  • 雑誌名: Biol Reprod 巻: 93巻 号: 4 ページ: 1-8
  • DOI: 10.1095/biolreprod.115.131490
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Stem cells in the uterus: past, present and future. (2015)
  • 著者名/発表者名: Maruyama T
  • 雑誌名: Semin Reprod Med 巻: 33巻 号: 05 ページ: 315-316
  • DOI: 10.1055/s-0035-1563408
• [雑誌論文] Stem cells in endometrial physiology. (2015)
  • 著者名/発表者名: Gurung S, Deane JA, Masuda H, Maruyama T, Gargett CE
  • 雑誌名: Semin Reprod Med 巻: 33巻 号: 05 ページ: 326-332
  • DOI: 10.1055/s-0035-1558405
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Uterine leiomyoma stem cells: linking progesterone to growth. (2015)
  • 著者名/発表者名: Bulun SE, Moravek MB, Yin P, Ono M, Coon V JS, Dyson MT, Antonia N, Marsh EE, Zhao H, Maruyama T, Chakravarti D, Kim JJ, Wei JJ
  • 雑誌名: Semin Reprod Med 巻: 33巻 号: 05 ページ: 357-365
  • DOI: 10.1055/s-0035-1558451
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Cell therapy and tissue engineering from and toward the uterus. (2015)
  • 著者名/発表者名: Cervello I, Santamaria X, Miyazaki K, Maruyama T, Simon C
  • 雑誌名: Semin Reprod Med 巻: 33巻 号: 05 ページ: 366-372
  • DOI: 10.1055/s-0035-1559581
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Stem Cells in Myometrial Physiology (2015)
  • 著者名/発表者名: Ono M, Maruyama T
  • 雑誌名: Semin Reprod Med 巻: 33巻 号: 05 ページ: 350-356
  • DOI: 10.1055/s-0035-1563602
  • 査読あり
• [雑誌論文] CD34 and CD49f double-positive and lineage marker-negative cells isolated from human myometrium exhibit stem cell-like properties involved in pregnancy-induced uterine remodeling. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ono M, Kajitani T, Uchida H, Arase T, Oda H, Uchida S, Ota K, Nagashima T, Masuda H, Miyazaki K, Asada H, Hida N, Mabuchi Y, Morikawa S, Ito M, Bulun SE, Okano H, Matsuzaki Y, Yoshimura Y, Maruyama T
  • 雑誌名: Biol Reprod 巻: 93巻 号: 2 ページ: 1-9
  • DOI: 10.1095/biolreprod.114.127126
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] ヒト子宮の平滑筋および平滑筋種における幹細胞 ― 妊娠から子宮筋腫まで ―． (2015)
  • 著者名/発表者名: 丸山哲夫，小野政徳
  • 雑誌名: 日本生殖内分泌学会雑誌 巻: 20巻 ページ: 29-33
• [学会発表] Role of stem cells in pathophysiology of uterine leiomyoma. (2016)
  • 著者名/発表者名: Masanori Ono, Tetsuo Maruyama, Mamoru Tanaka, Daisuke Aoki, Serdar E. Bulun
  • 学会等名: 5th Asian Conference on Endometriosis (ACE2016)
  • 発表場所: 大阪国際会議場（大阪府大阪市）
  • 国際学会 / 招待講演
• [学会発表] Bioengineered uterus and endometrial reconstruction by stem cells. (2015)
  • 著者名/発表者名: Tetsuo Maruyama
  • 学会等名: 21st The International Federation of Gynecology and Obstetrics(FIGO) World Congress of Gynecology and Obstetrics
  • 発表場所: Vancouver, Canada
  • 年月日: 2015-10-04
  • 国際学会 / 招待講演
• [学会発表] [第84回 北里賞受賞講演] 雌性生殖器官の幹細胞システムの解明と再生医学への展開． (2015)
  • 著者名/発表者名: 丸山哲夫
  • 学会等名: 第84回北里記念式
  • 発表場所: 慶應義塾大学医学部（東京都新宿区）
  • 年月日: 2015-06-23
  • 招待講演
• [学会発表] Decellularized uterine matrix can promote uterine regeneration in vivo without immune rejection upon allotransplantation. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kaoru Miyazaki, Yuki Ueno, Hirotaka Masuda, Hiroshi Uchida, Tetsuo Maruyama
  • 学会等名: International Federation of Fertility Societies / Japan Society for Reproductive Medicine (IFFS / JSRM) International Meeting 2015
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2015-04-26
  • 国際学会
• [学会発表] 脱細胞化と再細胞化による子宮の再構築． (2015)
  • 著者名/発表者名: 宮崎 薫，丸山哲夫
  • 学会等名: 第88回日本内分泌学会
  • 発表場所: ホテルニューオータニ（東京都千代田区）
  • 年月日: 2015-04-23
  • 招待講演
• [学会発表] 性ステロイドはWNT/β-カテニンシグナルを介して子宮筋腫を発育させる． (2015)
  • 著者名/発表者名: 小野政徳，丸山哲夫，セルダーブルン
  • 学会等名: 第88回日本内分泌学会
  • 発表場所: ホテルニューオータニ（東京都千代田区）
  • 年月日: 2015-04-23
• [学会発表] 同種異系移植におけるラット子宮脱細胞化マトリックスの免疫原性と再生組織の内分泌学的検討． (2015)
  • 著者名/発表者名: 上野友輝，宮崎 薫，升田博隆，内田 浩，丸山哲夫
  • 学会等名: 第88回日本内分泌学会
  • 発表場所: ホテルニューオータニ（東京都千代田区）
  • 年月日: 2015-04-23
• [学会発表] ヒト子宮の幹細胞研究の最前線 ～子宮内膜症・子宮筋腫の謎に迫る～ ． (2015)
  • 著者名/発表者名: 丸山哲夫
  • 学会等名: 北九州産婦人科医会・八幡産婦人科医会学術講演会
  • 発表場所: リーガロイヤルホテル小倉（福岡県北九州市）
  • 年月日: 2015-04-14
  • 招待講演
• [図書] Uterine Fibroids and Adenomyosis (2017)
  • 著者名/発表者名: Ono M, Maruyama T, Fujiwara H, Bulun SE
  • 出版者: Springer
• [図書] Uterine endometrial Function (2016)
  • 著者名/発表者名: Maruyama T
  • 総ページ数: 155
  • 出版者: Springer
• [図書] Uterine endometrial Function (2016)
  • 著者名/発表者名: Maruyama T
  • 出版者: Springer, Japan
• [図書] 三次元ティッシュエンジニアリング ～ 細胞の培養・操作・組織化から品質管理、脱細胞化まで ～ (2015)
  • 著者名/発表者名: 宮崎 薫，丸山哲夫
  • 総ページ数: 400
  • 出版者: エヌ・ティー・エス
• [備考] 慶應義塾大学医学部産婦人科学教室・生殖内分泌研究室
  • URL: http://www.obgy.med.keio.ac.jp/reearch/03rep-endo.php
• [備考] 慶應義塾大学医学部 産婦人科学教室ホームページ内 生殖内分泌研究室
  • URL: http://www.obgy.med.keio.ac.jp/04research/03rep-endo.html