リンパ管形成の分子機構解明とがんリンパ節転移の制御

• 研究課題/領域番号: 16022238
• 研究種目: 特定領域研究
• 配分区分: 補助金
• 審査区分: 生物系
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 久保 肇 京都大学, 医学研究科, 研究員(科学技術振興)(常勤形態) (50362520)
• 研究期間 (年度): 2004
• 研究課題ステータス: 完了 (2004年度)
• 配分額: 6,400千円 (直接経費: 6,400千円); 2004年度: 6,400千円 (直接経費: 6,400千円)
• キーワード: 血管新生 / リンパ管新生 / リンパ節転移

研究概要

[方法](1)胃癌細胞株AZL5Gをヌードマウス胃壁に同所性に移植すると6週間で所属リンパ節に転移する。このマウスに抗VEGFR3抗体を3日毎に全身投与して、リンパ節転移を抑制するかどうか調べた。(2)ヒトpodoplaninのFcキメラタンパクの発現ベクターを作成し、293細胞を用いてタンパクを精製した。それを抗原としてマウスを免疫し、モノクローナル抗体を作成した。ELISA、免疫染色、FACSに使用できるものを検索した。
[結果]抗VEGFR3によってリンパ節転移が阻止された。AZL5Gは親株と比較しVEGF-Cの発現が高く、腫瘍内リンパ管数は33.3±5.6/視野で、ヒト胃がんのリンパ節転移陽性例に相当した。抗VEGFR3抗体投与群では、10.5±1.5/視野に低下した。リンパ節転移はコントロール群が75%に対し、抗VEGFR3群では19%に低下した。原発腫瘍の重量と血管数には差が認められなかった。
ヒトpodoplaninに対するモノクローナル抗体を作成した。ELISAにて、24個のクローンを得た。その中から、免疫染色、FACSに使用できるクローン7B10を同定した。7B10抗体によって、LECが免疫染色されている図を示す。7B10にAPCを付加した7B10-APCを用いたFACS解析で、podoplanin発現株が区分できた。
[考察]抗VEGFR3抗体によってリンパ管新生が抑制され、結果としてリンパ節転移を阻止する可能性がマウス実験で確かめられた。今後、この治療法の別の薬剤の可能性を探り、実際の治療法としての確立にむけた努力が必要となる。また、抗podoplanin抗体を用いて、腫瘍組織から腫瘍LECを分離培養する。遺伝子発現プロファイルから、腫瘍LECに特異的な遺伝子を同定した。

研究成果

• [雑誌論文] Vascular endothelial growth factor-D is dispensable for development of the lymphatic system. (2005)
  • 著者名/発表者名: Baldwin ME, Halford MM, Roufail S, Williams RA, Hibbs ML, Grail D, Kubo H, Stacker SA, Achen MG
  • 雑誌名: Mol Cell Biol. 25 ページ: 2441-2449
• [雑誌論文] Molecular mechanisms of lymphangiogenesis. (2004)
  • 著者名/発表者名: Takahashi M, Yoshimoto T, Kubo H.
  • 雑誌名: Int J Hematol. 80・1 ページ: 29-34
  • NAID: 10013333909
• [雑誌論文] Suppression of VEGFR-3 signaling inhibits lymph node metastasis in gastric cancer (2004)
  • 著者名/発表者名: Shimizu K, Kubo H, Yamaguchi K, Kawashima K, Ueda Y, Matsuo K, Awane M, Shimahara Y, Takabayashi A, Yamaoka Y, Satoh S.
  • 雑誌名: Cancer Sci. 95 ページ: 328-333
  • NAID: 10013722475
• [雑誌論文] Molecular mechanisms of lymphangiogenesis in diseases. (2004)
  • 著者名/発表者名: Kubo H., Kono T
  • 雑誌名: Microcirculation annual. 20 ページ: 3-4