| 研究課題/領域番号 |
16370049
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
構造生物化学
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
河野 敬一 北海道大学, 大学院理学研究院, 教授 (10136492)
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| 研究分担者 |
早川 洋一 佐賀大学, 農学部, 教授 (50164926)
川畑 俊一郎 九州大学, 大学院理学研究科, 教授 (90183037)
水口 峰之 富山大学, 大学院医学薬学研究部, 助教授 (30332662)
相沢 智康 北海道大学, 大学院先端生命科学研究院, 助教授 (40333596)
出村 誠 北海道大学, 大学院先端生命科学研究院, 教授 (70188704)
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| 研究期間 (年度) |
2004 – 2006
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| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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| 配分額 *注記 |
14,500千円 (直接経費: 14,500千円)
2006年度: 3,200千円 (直接経費: 3,200千円)
2005年度: 3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
2004年度: 7,900千円 (直接経費: 7,900千円)
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| キーワード | 自然免疫 / タンパク質 / 立体構造解析 / ペプチド / 無脊椎動物 / GBP / サイトカイン / 細胞成長因子 / 昆虫 / 生体防御 / 立体構造 |
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| 研究概要 |
GBPはカリヤコマユバチに寄生されたアワヨトウ幼虫から単離された25残基のアミノ酸からなるサイトカインである。GBPの3次構造はしっかりした構造をもつコア領域とフレキシブルなN、C末端からなる。フレキシブルなN末端領域が活性発現に重要であることから、この領域に挿入、置換、削除した各種部位特異的変異体を構築して、GBPとその受容体の相互作用様式について検討を加えた。またc末端領域についても検討した。未寄生の幼虫では23残基のGBPが発現しているが寄生に伴って終止コドンがTyrに翻訳され28残基からなるC端の延長した1-28GBPとなる。1-28GBPは野生型の1-25GBPよりも高い活性を示すことからその機構を解明することは興味深い。我々はC端部分がレセプターとの結合に何らかの役割を果たしているのではないかと考え、疎水性溶媒中での1-28GBPの立体構造変化を検討した。疎水性環境ではF23,Y24,I27の側差間で新たなNOEが得られたことから、C端部分の活性への寄与はレセプターとの疎水相互作用であることが示唆された。更にDPCミセル中での1-28GBPの立体構造を検討したところ、C端部分がヘリックス構造を形成していることを見出した。またスピンラベルしたDPCを用いることにより、GBPはミセル表層に局在していることが明らかになった。以上より1-28GBPの高活性発現機構を議論した。
昆虫サイトカインはGBPの他にも多数存在することが推定されるが、現在までほとんど発見されていない。本研究では、新規サイトカインを血球細胞活性化活性を指標として探索し、アワヨトウ幼虫外皮抽出液から、新規サイトカインの単離に成功した。cDNAのクローニングをも行い、32残基の全長配列を決定できた。合成ペプチドによっても血球活性化活性を確認できた。更に活性発現機構等について研究を進め、GBPとは異なる受容体をAGFが認識していることが示唆された。
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