| 研究課題/領域番号 |
16370051
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
構造生物化学
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| 研究機関 | 横浜市立大学 |
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研究代表者 |
緒方 一博 横浜市立大学, 医学研究科, 教授 (90260330)
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| 研究分担者 |
佐藤 光 横浜市立大学, 医学部, 助手 (90300962)
椎名 政昭 横浜市立大学, 医学部, 助手 (30347299)
浜田 恵輔 横浜市立大学, 医学部, 助手 (00344052)
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| 研究期間 (年度) |
2004 – 2005
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| 研究課題ステータス |
完了 (2005年度)
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| 配分額 *注記 |
15,300千円 (直接経費: 15,300千円)
2005年度: 7,400千円 (直接経費: 7,400千円)
2004年度: 7,900千円 (直接経費: 7,900千円)
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| キーワード | 核磁気共鳴法 / 表面プラズモン共鳴 / 構造的揺らぎ / Runx1 / CBFβ / Ets1 / リン酸化 / 協調的DNA結合活性 / 転写制御因子 / 急性白血病 / 磁気緩和時間測定 / 揺らぎ / 転写制御因子高次複合体 / c-Myb / C / EBP / プロモーター / アロステリック |
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| 研究概要 |
本研究では、血球分化に関わる転写制御因子Runx1,CBFβおよびEts1等を中心に、これらの標的プロモーター(エンハンサー)における活性制御機構を解析するために、X線結晶構造解析、核磁気共鳴法による分子の揺らぎの解析、および表面プラズモン法や培養細胞による転写活性化実験等の機能実験を行った。
DNA結合性の転写制御因子Runx1の活性は、DNA非結合性の転写制御因子CBFβによってアロステリックに制御されている。CBFβ存在下および非存在下におけるRunx1-DNA複合体中でのRunx1の揺らぎをNMRを用いて解析した。また、動的構造解析から、制御にとって重要であると予想される残基に変異を導入し、生化学的機能を解析した。その結果、Runx1の分子の揺らぎの変化が、転写制御因子の機能制御と密接に関連することを見出した。
複数の転写制御因子による協調的DNA結合活性制御機構および転写制御因子の化学修飾による転写制御因子複合体形成への影響を解析するため、T細胞抗原受容体α鎖のエンハンサーに形成される、Runx1-CBFβ-Ets1-DNA複合体およびRunx1-CBFβ-リン酸化Ets1-DNA複合体の形成機構について、X線結晶構造解析による静的構造解析と、ゲルシフトアッセイおよび転写活性化実験による機能解析を行い、Runx1およびEts1の転写制御領域と制御様式を詳細に決定した。
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