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未知のポリADP-リボシル化タンパク質の同定とその修飾部位の決定

研究課題

研究課題/領域番号 16390072
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 医化学一般
研究機関長浜バイオ大学 (2005)
筑波大学 (2004)

研究代表者

三輪 正直  長浜バイオ大学, バイオサイエンス学部, 教授 (20012750)

研究分担者 亀村 和生  長浜バイオ大学, バイオサイエンス学部, 講師 (00399437)
研究期間 (年度) 2004 – 2005
研究課題ステータス 完了 (2005年度)
配分額 *注記
12,400千円 (直接経費: 12,400千円)
2005年度: 6,000千円 (直接経費: 6,000千円)
2004年度: 6,400千円 (直接経費: 6,400千円)
キーワード翻訳後修飾 / ポリADP-リボシル化 / ポリ(ADP-リボース)分解酵素 / ショウジョウバエ / ポリ(ADP-リボース)合成酵素 / 中心体 / ポリADP-リボース / p53 / ポリADP-リボース分解酵素 / 神経変性 / 細胞周期 / 細胞分裂
研究概要

中心体におけるポリADP-リボシル化タンパク質として、現在2つを同定している。一つはがん抑制遺伝子産物p53であり、もう一つは、サイクリンE/CDK2によって中心体でリン酸化を受け、中心体複製制御に関与するNucleophosmin/B23である。p53のポリADP-リボシル化部位の同定のために、まず、GST-p53融合タンパク質を大腸菌内で作成を行った。これを用いて、in vitroで全長のp53(aa 1-393)がPARP-1により、ポリADP-リボシル化を受けることを確認した。次に、ドメインごとに分けたGST-truncated p53を作成し、ポリADP-リボシル化されるドメイシを決定した。現在約40アミノ酸の長さに相当するペプチドを部分的に欠失するGST-truncated p53を作製しており、ポリADP-リボシル化を受けるペプチド領域を調べている。その結果、p53のDNA結合ドメインの一部に相当する40アミノ酸に相当する部位を欠失した場合に著明にポリADP一リボシル化が低下する結果を得ている。
抗ポリADP-リボースマウスモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ<IOH)を以前に作成した。In vivoでポリADP-リボシル化されたタンパク質を網羅的に同定するために、この抗体カラムを作成し、中心体画分やそれぞれの細胞周期に応じた画分から、ポリADP-リボシル化されたタンパク質を分離する条件を検討している。量的な問題から、まず、In vivoでポリADP-リボシル化されるタンパク質として、PARGノックアウト・ショウジョウバエの中枢神経系で過剰にポリADP-リボシル化されたタンパク質を検出するため、そのノックアウトのハエをグラム単位で集めており、現在、その精製にかかっている。

報告書

(3件)
  • 2005 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2004 実績報告書
  • 研究成果

    (19件)

すべて 2006 2005 2004 その他

すべて 雑誌論文 (17件) 図書 (2件)

  • [雑誌論文] ポリ(ADP-リボース)代謝と細胞機能2006

    • 著者名/発表者名
      三輪 正直, 益谷 美都子
    • 雑誌名

      生化学(日本生化学会誌 : 総説) 78(In press)

    • NAID

      10019271318

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2005 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Suppression of centrosome amplification after DNA damage depends on p27 accumulation2006

    • 著者名/発表者名
      Sugihara, E., Miwa, M., et al.
    • 雑誌名

      Cancer Res 66(In press)

    • 関連する報告書
      2005 実績報告書
  • [雑誌論文] ポリ(ADP-リボース)代謝と細胞機能2006

    • 著者名/発表者名
      三輪 正直, 益谷 美都子
    • 雑誌名

      生化学(日本生化学会誌:総説) 78(In press)

    • NAID

      10019271318

    • 関連する報告書
      2005 実績報告書
  • [雑誌論文] Poly(ADP-ribosyl)ation (in Japanese)2005

    • 著者名/発表者名
      Miwa, M., Kanai, M., Uchida, M., Hanai, S.
    • 雑誌名

      Protein Science Illustrated (Takenawa, T. ed.)(Yodosha)

      ページ: 160-167

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2005 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Characterization and genetic analysis in the newly established human bile duct cancer cell line2005

    • 著者名/発表者名
      Ghosh, M., et al.
    • 雑誌名

      Int.J.Oncol. 26

      ページ: 449-456

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Loss of poly(ADP-ribose) glycohydrolase causes progressive neurodegeneration in Drosophila melanogaster.2004

    • 著者名/発表者名
      Hanai, S., Kanai, M., Okamoto, K., Yamada, M., Takahashi, H., Miwa, M.
    • 雑誌名

      Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101

      ページ: 82-86

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2005 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Enhanced expression of MYCN leads to centrosome hyperamplification after DNA damage in neuroblastoma cells.2004

    • 著者名/発表者名
      Sugihara, E., Kanai, M., Matsui, A., Onodera, M., Schwab, M., Miwa, M.
    • 雑誌名

      Oncogene 23(4)

      ページ: 1005-1009

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2005 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Loss of poly(ADP-ribose) glycohydrolase causes progressive neurodegeneration in Drosophila melanogaster.2004

    • 著者名/発表者名
      Hanai, S., Kanai, M., Okamoto, K., Yamada, M., Takahashi, H., Miwa, M.
    • 雑誌名

      Proc Natl.Acad.Sci.USA 101(1)

      ページ: 82-86

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2005 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Roles of poly(ADP-ribose) metabolism in the regulation of centrosome duplication and in the maintenance of neuronal integrity.2004

    • 著者名/発表者名
      Miwa, M., Kanai, M., Uchida, M., Uchida, K., Hanai S.
    • 雑誌名

      Landes Bioscience (Georgetown, TX.U.S.A.)

      ページ: 51-60

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2005 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] New development of research on poly (ADP-ribosyl) ation (in Japanese)2004

    • 著者名/発表者名
      Miwa, M., Kanai, M., Hanai, S.
    • 雑誌名

      Jikken Igaku 22(9)

      ページ: 1267-1273

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2005 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Cellular function by poly(ADP-ribosyl)ation, especially the regulation of centrosome function and neuronal cells (in Japanese)2004

    • 著者名/発表者名
      Miwa, M., Kanai, M., Sugihara, E., Ohashi, S., Nogi, Y., Hanai, S.
    • 雑誌名

      Vitamin 78(7)

      ページ: 337-246

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2005 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Loss of poly(ADP-ribose) glycohydrolase causes progressive neurodegeneration in Drosophila melanogaster2004

    • 著者名/発表者名
      Hanai, S., et al.
    • 雑誌名

      Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101

      ページ: 82-86

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Enhanced expression of MYCN leads to centrosome hyperamplification after DNA damage in neuroblastoma cells2004

    • 著者名/発表者名
      Sugihara, E., et al.
    • 雑誌名

      Oncogene 23

      ページ: 1005-1009

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Integration of human T-cell leukemia virus type 1 in genes of leukemia cells of patients with adult T-cell leukemia2004

    • 著者名/発表者名
      Hanai, S., et al.
    • 雑誌名

      Cancer Sci. 95

      ページ: 306-310

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Nuclear localization of Vpr is crucical for the efficient replication of HIV-1 in primary CD4+ T cells2004

    • 著者名/発表者名
      Iijima, S., et al.
    • 雑誌名

      Virology 327

      ページ: 249-261

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Increased cell proliferation of mouse fibroblast NIH-3T3 in vitro induced by excretory/secretory product(s) from Opisthorchis vivemini2004

    • 著者名/発表者名
      Thuwajit, C., et al.
    • 雑誌名

      Parasitology 129

      ページ: 455-464

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Metabolism and function of poly(ADP-ribose) (in Japanese)

    • 著者名/発表者名
      Miwa, M., Masutani, M.
    • 雑誌名

      Seikagaku (Journal of Japanese Biochemical Society) (in press)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2005 研究成果報告書概要
  • [図書] タンパク質科学イラストレイテッド(竹縄 忠臣編)pp.160-167(分担執筆)2005

    • 著者名/発表者名
      三輪 正直, 金居 正幸, 内田 真啓, 花井修次
    • 総ページ数
      332
    • 出版者
      羊土社
    • 関連する報告書
      2005 実績報告書
  • [図書] Poly(ADP-Ribosyl)ation (Burkle, A ed.,), Landes Bioscience2004

    • 著者名/発表者名
      Miwa, M., et al.
    • 総ページ数
      10
    • 出版者
      Roles of poly (ADP-ribose) metabolism in the regulation of centrosome duplication and in the maintenance of neuronal integrity
    • 関連する報告書
      2004 実績報告書

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公開日: 2004-04-01   更新日: 2016-04-21  

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