| 研究課題/領域番号 |
16390278
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
血液内科学
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
松村 到 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (00294083)
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| 研究分担者 |
金倉 譲 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (20177489)
水木 満佐央 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (80283761)
柴山 浩彦 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (60346202)
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| 研究期間 (年度) |
2004 – 2005
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| 研究課題ステータス |
完了 (2005年度)
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| 配分額 *注記 |
12,200千円 (直接経費: 12,200千円)
2005年度: 4,800千円 (直接経費: 4,800千円)
2004年度: 7,400千円 (直接経費: 7,400千円)
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| キーワード | NF-κB / アポトーシス / 活性酸素種 / サイトカイン / ミトコンドリア膜電位 / H2O2 / OP9システム |
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| 研究概要 |
マウスIL-3依存性細胞株Ba/F3に造血因子受容体を発現させ、更に優性阻害型NF-κB(IκBSR)を誘導的に発現させると、低濃度のIL-3、EPO依存性増殖が抑制された。更に、IκBSRは、IL-3除去によるBa/F3細胞のアポトーシスを増強した。この際、IκBSR導入クローンではMockクローンに比べてミトコンドリア膜電位(Δψm)が低下していた。Δψmは活性酸素種(ROS)によっても制御されることから、IκBSRがIL-3除去後のROSの蓄積に及ぼす影響をFACSで検討した。MockクローンではIL-3除去後12時間でROSが軽度蓄積したが、IκBSR導入クローンではIL-3除去前からROSが過剰に蓄積し、IL-3除去後もそれ以上は増加しなかった。次に、ROSを消去するMnSOD、TRXをIκBSR導入クローンに過剰発現させたところ、IκBSRによるアポトーシスの増強はほぼ完全に回避された。以上の結果より、Ba/F3細胞におけるIκBSRによるIL-3除去によるアポトーシスの亢進にはROSが関与していることが示された。
マウス造血幹/前駆細胞(Lin^-Sca1^+細胞)にIκBSRを発現させたところ、各種サイトカイン存在下でもアポトーシスが誘導された。IκBSR導入細胞では、Δψmが低下しており、ROSの蓄積も認められた。ROS蓄積の原因としては、IκBSR導入細胞では、細胞内グルタチオン濃度が減少し、MnSOD、GPX、TRXの発現が抑制されていた。また、IκBSRによるアポトーシスは、H2O2代謝剤であるMCI、NAC、TRXにより回避されたが、O2^+代謝剤であるMnTBAPはほとんど効果を示さなかった。以上の結果から、IκBSRは正常造血幹/前駆細胞において、ROS(特にH2O2)の蓄積を介してアポトーシスを誘導すると考えられた。
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