アメリカザリガニの水分調節に関する研究

• 研究課題/領域番号: 16570126
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 機能生物化学
• 研究機関: (財)サントリー生物有機科学研究所
• 研究代表者: 安田 好美 (釜谷 好美) (財)サントリー生物有機科学研究所, 研究員 (10270571)
• 研究分担者: 安田 明和 (財)サントリー生物有機科学研究所, 主席研究員 (90211614)
• 研究期間 (年度): 2004 – 2006
• 研究課題ステータス: 完了 (2006年度)
• 配分額: 3,700千円 (直接経費: 3,700千円); 2006年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円); 2005年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円); 2004年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
• キーワード: ザリガニ / 腹部神経節 / 神経ペプチド / MALDI-TOF-MS / クローニング / in situ hybridization / 肛門 / 後腸 / アメリカザリガニ / ミオサプレッシン / タキキニン関連ペプチド / CCAP / オルコキニン / cDNAクローニング / アミド化酵素 / SIFアミド / アラトスタチン / FLRFアミド / RT-PCR

研究概要

Topological mass spectrometry分析とはMALDI-TOF MSやquadrupole orthogonal acceleration time-of-flight (Q-TOF) MS分析とクローニング法を組み合わせて神経ペプチドを効率良くスクリーニングする方法である。本研究で我々はこの手法を用い、アメリカザリガニにおける水分調節に関わる神経ペプチドの同定を試みた。まず肛門呼吸を通じた水分調節に焦点を定め、肛門や後腸の動きを支配している神経細胞を含む第六腹部神経節の切片を作製し、direct MALDI-TOF MS分析を行った。結果、オルコキニン類や甲殻類SIFamide、タキキニン関連ペプチド、甲殻類心臓作用性ペプチド(CCAP)の存在が明らかになったが、他に未知物質の存在を示唆するデータが得られた。その内、分子量1270のものについては、分子量を指標とした精製を行い、Q-TOF MS/MS分析によって部分配列が(L/1)DHVF(L/1)RFamdeでありミオサプレッシン様ペプチド(MSLP)と示唆された。またMSLPとCCAPの前駆体クローニングにより、その周辺配列は夫々-KRQDLDHVFLRFGRSQ(Stop)及び-KRPFCNAFTGCGKKR-であると判明し、MSLPはpEDLDHVFLRFamideであると決定できた。さらにその神経節におけるin situ hybridization解析を行うことにより、後腸を直接支配しているposterior median cell clusterがオルコキニンのみならずMSLPも産生しており、CCAPはこれら細胞群の両脇に接している細胞で産生されていることが示唆された。次に、これら種々の神経ペプチドを合成し、肛門や腸管に対する作用及び肛門からの水分の取り込みについて検定した結果、それぞれが肛門や後腸、直腸の各部位に対して特異的な作用を示すことが判明し、水分の取り込みは複数のペプチドによる複合的な作用により支配されていることが示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Characteristic expression patterns of allatostatin-like peptide, FMRFamide-related peptide, orcokinin, tachykinin-related peptide, and SIFamide in the olfactory system of crayfish Procambarus clarkii. (2006)
  • 著者名/発表者名: Yasuda-Kamatani, Y., Yasuda, A.
  • 雑誌名: J. Comp. Neurol. 496 ページ: 135-147
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Posttranslational processing of proopiomelanocortin family molecules in sea lamprey based on mass spectrometric and chemical analyses. (2006)
  • 著者名/発表者名: Takahashi, A., Yasuda, A., Sower, S., Kawauchi,H
  • 雑誌名: Gen Comp Endocrinol. 148 ページ: 79-84
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Characteristic expression patterns of allatostatin-like peptide, FMRFamide-related peptide, orcokinin, tachykinin-related peptide, and SIFamide in the olfactory system of crayfish Procambarus clarkii. (2006)
  • 著者名/発表者名: Yasuda-Kamatani, Y., Yasuda, A.
  • 雑誌名: J.Comp.Neurol. 496 ページ: 135-147
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Posttranslational processing of proopiomelanocortin family molecules in sea lamprey based on mass spectrometric and chemical analyses. (2006)
  • 著者名/発表者名: Takahashi, A., Yasuda, A., Sower, S., Kawauchi, H.
  • 雑誌名: Gen Comp Endocrinol. 148 ページ: 79-84
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Nucleotide sequence and expression of three subtypes of proopiomelanocortin mRNA in barfin flounder. (2005)
  • 著者名/発表者名: Takahashi, A., Amano, M., Itoh, T., Yasuda, A., Yamanome, T., et al.
  • 雑誌名: Gen. Comp. Endocrinol. 141 ページ: 291-303
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Nucleotide sequence and expression of three subtypes of proopiomelanocortin mRNA in barfin flounder. (2005)
  • 著者名/発表者名: Takahashi, A., Amano, M., Itoh, T., Yasuda, A., Yamanome, T., Amemiya, Y., Sasaki, K., Sakai, M., Yamamori, K., Kawauchi, H.
  • 雑誌名: Gen.Comp.Endocrinol. 141 ページ: 291-303
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Prepro-tachykinin gene expression in the honeybee Apis mellifera L. brain. (2004)
  • 著者名/発表者名: Takeuchi, H., Yasuda, A., Yasuda-Kamatani, Y., et al.
  • 雑誌名: Cell Tissue Res. 316 ページ: 281-293
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] APSGFLGMRamide is a unique tachykinin-related peptide in crustaceans. (2004)
  • 著者名/発表者名: Yasuda-Kamatani, Y., Yasuda, A.
  • 雑誌名: Eur. J. Biochem. 271 ページ: 1546-1556
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Possible involvement of melanin-concentrating hormone in food intake in a teleost fish, barfin flounder. (2004)
  • 著者名/発表者名: Takahashi, A., Tsuchiya, K., Yamanome, T., Amano, M., Yasuda, A., et al.
  • 雑誌名: Peptides 25 ページ: 1613-1622
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Prepro-tachykinin gene expression in the honeybee Apis mellifera L.brain. (2004)
  • 著者名/発表者名: Takeuchi, H., Yasuda, A., Yasuda-Kamatani, Y., Sawata, M., Matsuo, Y., Kato, A., Tsujimoto, A., Nakajima, T., Kubo T.
  • 雑誌名: Cell Tissue Res. 316 ページ: 281-293
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] APSGFLGMRamide is a unique tachykinin-related peptide in crustaceans. (2004)
  • 著者名/発表者名: Yasuda-Kamatani, Y., Yasuda, A.
  • 雑誌名: Eur.J.Biochem. 271 ページ: 1546-1556
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Possible involvement of melanin-concentrating hormone in food intake in a teleost fish, barfin flounder. (2004)
  • 著者名/発表者名: Takahashi, A., Tsuchiya, K., Yamanome, T., Amano, M., Yasuda, A., Yamamori, K., Kawauchi, H.
  • 雑誌名: Peptides 25 ページ: 1613-1622
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] New strategy for the exploration of neuropeptides (in Japanese) (2004)
  • 著者名/発表者名: Yasuda, A., Yasuda, Y.
  • 雑誌名: Kagaku to Seibutu 42 ページ: 834-841
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Prepro-tachykinin gene expression in the brain honeybee Apis mellifera (2004)
  • 著者名/発表者名: Takeuchi H., Yasuda A., Yasuda-Kamatani Y., Sawata M., Matsuo Y., Kato A., Tsujimoto A., Nakajima T., Kubo T.
  • 雑誌名: Cell Tissue Res. 316 ページ: 281-293
• [雑誌論文] 新規生理活性のペプチドの新しい探索法 (2004)
  • 著者名/発表者名: 安田明和, 安田好美
  • 雑誌名: 化学と生物 42 ページ: 834-841
• [図書] 化学と生物 (2004)
  • 著者名/発表者名: 安田明和, 安田好美
  • 出版者: 新規生理活性ペプチドの新しい探索法
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より