| 研究課題/領域番号 |
16580037
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
応用昆虫学
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| 研究機関 | 東京農工大学 |
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研究代表者 |
平岡 毅 東京農工大学, 大学院共生科学技術研究院, 助教授 (10238339)
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| 研究期間 (年度) |
2004 – 2006
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| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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| 配分額 *注記 |
3,700千円 (直接経費: 3,700千円)
2006年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2005年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
2004年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
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| キーワード | 昆虫培養細胞 / 分泌タンパク質 / 機能性タンパク質 |
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| 研究概要 |
鱗翅目昆虫培養細胞系であるMaBrの大量培養に関し、スピナーフラスコによる大量培養をおこない脂肪体細胞においてEGF様昆虫サイトカインとして分類されるgrowth blocking peptide(GBP)が発現していることをRT-PCRによって明らかとした。このほかにもドーパミンの生体内アミンの生産に寄与しているドーパデカルボキシラーゼの発現も確認した。トリプシンインヒビターの活性もタンパクレベルで確認したが量的には少ない物であった。ヒトシズシマカ由来の培養細胞系であるAeAl-2においては付着細胞系でありビーズへの付着によるスピナーフラスコ系への導入を試みたが不調に終わり、製面培養により培養を行った。この培養上清にアセチルコリンエステラーゼ活性が認められDEAEカラム、アフィニティーカラム、ゲル濾過カラム等により分子量約67000のSDS-PAGEで単一のバンドを得た。細胞における活性染色により、細胞がクラスターを作っている部分でアセチルコリンェステラーゼ活性高いことが解り、細胞の機能とタンパク質の関係について今後の研究が待たれる。また両培養細胞系培養上清にトリプシンィンヒビター活性がみられた。AeAl-2培養細胞系はインヒビター活性が強く、トリプシンインヒビターの精製を試みた。トリプシンによるアフイニティーカラムを用いたが結合が強く溶出できなかった。現在は他の方法で精製を試みている。MaBr細胞系においてwestern blotting方により貯蔵タンパク質、リポホリンの抗体に対する反応が認められた。
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