| 研究概要 |
本研究では,ニワトリ胚性幹細胞を用いてニワトリにおける遺伝子ノックイン・アウト技術を確立することを目的に研究を行ってきた.2年間でニワトリLIFやその他因子の遺伝しクローニングや培養条件の検討,ターゲティングベクターの構築等を行い以下の結果を得た.
(1)ニワトリLIFの遺伝子クローニングからリコンビナントタンパク質の作製を行い,ニワトリ胚性幹細胞の培養に極めて有効であることを示すとともに,培養系の確立を行った.また,ニワトリLIFに対するモノクローナル抗体の作出も合わせて行い,ニワトリLIFの検出系並びに有効性の確認に使用できることを証明した.
(2)その他の培養系添加因子としてニワトリIL-6の遺伝子クローニングを行い,抗体の作製をおこなった.しかしニワトリ胚性幹細胞培養系にはLIFのみで十分であることがわかった.
(3)ニワトリ胚性幹細胞に対する遺伝子導入後の選抜(ポジティブ選抜およびネガティブ選抜)の条件を決定した.
(4)ニワトリδ-クリスタリンおよびビテロゲニンの遺伝子クローニングを行い,これらの一部の領域を標的としたターゲティングベクターの構築を行った.
本研究では,最終目標であるニワトリ胚性幹細胞を用いてニワトリにおける遺伝子ノックイン・アウト技術を確立までには至らなかったが,技術確立のための十分な成果の蓄積を行うことができた.今後,本研究を基盤としてニワトリにおける遺伝子ノックイン・アウト技術の確立が可能になるものと思われる.
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