| 研究課題/領域番号 |
16590033
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
物理系薬学
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| 研究機関 | 城西大学 |
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研究代表者 |
白幡 晶 城西大学, 薬学部, 教授 (50150107)
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| 研究分担者 |
杉田 義昭 (杉田 義明) 城西大学, 薬学部, 講師 (20255029)
池口 文彦 城西大学, 薬学部, 助教授 (00364711)
高尾 浩一 城西大学, 薬学部, 助手 (70337484)
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| 研究期間 (年度) |
2004 – 2006
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| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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| 配分額 *注記 |
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
2006年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
2005年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
2004年度: 2,600千円 (直接経費: 2,600千円)
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| キーワード | コンホメーション変化 / 蛍光SH基標識試薬 / C末端標識法 / MALDI-TOF MS / PSD / ポリアミン / グアニジン / 蛍光検出HPLC / アミノ酸配列分析 |
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| 研究概要 |
本研究ではまず、モデルタンパク質を用いて、化学試薬の標識量の変化を指標にして、MALDI-TOF MSにおいて低分子結合に基づくタンパク質のコンホメーション変化の検出が可能であることが分かった。次に、蛍光SH基標識を合成し、蛍光強度の変化による評価によりタンパク質のコンポメーション変化解析を可能とした。続いて、その蛍光標識タンパク質を酵素消化後、蛍光検出逆相HPLCピーク画分をMALDI-TOF MS及びMALDI-PSD TOF MSにて分析したところ、蛍光標識システインを含めたペプチドのアミノ酸配列解析ができることがわかった。そして、タンパク質のコンホメーション変化の網羅的解析の基礎検討実験として、コンホメーションの異なる同一のタンパク質を分子量の異なる2種類のSH基蛍光標識試薬によりそれぞれ蛍光標識し、酵素消化後、蛍光検出逆相HPLCに供し、そのピーク画分をMALDI-TOF MSにより解析した。その結果、シグナル強度の相対比較を指標に用いることにより、コンホメーション変化の評価系を開発した。
一方、タンパク質のシステイン残基のN残基で切断する試薬により、タンパク質の構造解析に極めて有用になる切断に伴うC末端の標識法を開発した。本標識法では、種々の電荷の異なるアルキルアミンによる標識に応用できることを見出し、かつタンパク質の構造解析に有用であることを示したのみならず、更に比較定量法への応用にも拡げることができた。
また、先述のポリアミン修飾ペプチドを化学的に作製する一方で、プロテアーゼ消化によって断片化されたペプチドがポリアミンにより修飾されることを見出した。これは、食事中に含まれるタンパク質は、消化され吸収される際、食品中に大量に存在するポリアミンが消化や吸収過程に何らかの影響を与える可能性を示唆することを示した。
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