| 研究概要 |
最近,種々のユビキチンに類似したタンパク質が次々と発見され,翻訳後修飾の役割について関心がもたれている.SUMO化はその一つであり,核への局在化,転写調節,さらには染色体の分裂などの諸課程において重要な役割を担っていることが明らかになってきた.本研究計画では,SUMOリガーゼPIAS1ならびにそのファミリーの構造とそれらのSUMO化標的タンパク質との相互作用を明らかにすることを目標に,(1)PIAS1の立体構造の決定,(2)癌抑制因子p53ならびに転写因子Lef-1やc-junに対するPIAS1の認識部位と構造,(3)PIAS1のサブタイプPIASyおよび酵母のホモログSiz1のN末端ドメインの構造解析を試みた.
PIAS1の標的タンパク質であるp53の結合部位を同定するために,多数のPIAS1の欠失変異体を作成し,癌抑制因子p53との相互作用の有無をGST pull-down assay法により調べた結果,p53はPIAS1のN末端側1-200残基の広い領域に結合することが明らかになった.また,PIAS1のN末端領域(1-65)がp53およびLef-1と相互作用の最小単位であることをGST pull-down assayにより実証した.しかし,これらの相互作用は,^1H-^<15>N HSQCスペクトルによる化学シフト摂動法によって確認できなかった.Lef-1等の転写因子の精製においてさらなる改善が望まれた.一方,このN端ドメインはc-junとは相互作用せず,結合部位は他にあることが分った.
PIAS1のサブタイプPIASyのN末端ドメイン(1-72)および酵母のホモログSiz1のN末端ドメイン(1-111)と(22-96)の大量発現系を構築した.それらの欠失変異体の精製も既に確立し,構造解析のための一連のNMR測定を開始している.
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