免疫学的手法による生体内酸化LDLの分離とその性状解析

• 研究課題/領域番号: 16590065
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 生物系薬学
• 研究機関: 昭和大学
• 研究代表者: 板部 洋之 昭和大学, 薬学部, 教授 (30203079)
• 研究分担者: 加藤 里奈 昭和大学, 薬学部, 助手 (30392400) ; 小浜 孝士 昭和大学, 薬学部, 助手 (60395647)
• 研究期間 (年度): 2004 – 2005
• 研究課題ステータス: 完了 (2005年度)
• 配分額: 3,500千円 (直接経費: 3,500千円); 2005年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円); 2004年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
• キーワード: 酸化LDL / 動脈硬化症 / モノクローナル抗体 / アポEノックアウトマウス / 質量分析 / 酸化ストレス / LDL

研究概要

我々は、抗酸化PCモノクローナル抗体(DLH3)を用いた酸化LDL高感度測定系の開発を通して、ヒト血漿中に酸化LDLの実在を示してきた。動脈硬化の発症要因である酸化LDLは、酸化LDLは多様な修飾を受けた不均一な粒子の集合であり、生体内の酸化LDLの具体的な性状ではいまだ明らかにされていない。本研究では、ヒト血漿から生体内酸化LDLを単離し、そのapoBタンパク質および脂質に対する変性構造を明らかにすることで、生体内でのLDLの酸化変性機序、生成した酸化LDLの代謝動態、そして血漿酸化LDL値の臨床的な意義を、より明確化することを目的とする。
DLH3抗体を用いた測定形に基づく推定で、血漿中の酸化LDLはLDL中の1/10000程度と極めて微量である。そこで、修飾タンパク構造を高感度で分析可能なESI-LC/MS/MS法を導入することにした。アクロレイン及び4-ヒドロキシノネナール(HNE)で修飾したヒトLDLを、トリプシン消化し質量分析装置にかけたところ、アクロレイン修飾リシン残基、HNE修飾ヒスチジン残基を含むapoB由来修飾ププチドの検出および同定に成功した。これら代表的な酸化的修飾部分は、酸化変性の良いマーカーとなり、生体内酸化LDLの分析を進める上で非常に有用である。また、酸化LDL中の酸化リン脂質や酸化ステロールのMSでの検出にも成功した。血漿酸化LDLの分析には、DLH3抗体、あるいは酸化LDL吸着性膜を用いて血漿中の酸化LDLの濃縮・分離が必要である。本年度、予備的な検討では血漿中の酸化LDL分離に成功したが、さらにスケールアップと回収条件の改良を目指している。またヒト血漿に加え、動脈硬化モデルであるapoEノックアウトマウスの血漿や動脈硬化巣から酸化LDLを分離・解析し、さらにヒト循環器疾患患者の血漿中の酸化LDLについても検討可能な系にしたいと考えている。

研究成果

• [雑誌論文] ADRP/adipophilin is degraded through proteasome-dependent pathway during regression of lipid-storing cells. (2006)
  • 著者名/発表者名: Masuda, Y., Itabe, H., Odaki, M., Hama, K., Fujimoto, Y., Mori, M., Sasabe, N., Aoki, J., Arai, H., Takano,T.
  • 雑誌名: Journal of Lipid Research 47 ページ: 87-98
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Expression of lectin-like oxidized LDL receptor-1 smooth muscle cells after vascular injury. (2006)
  • 著者名/発表者名: Eto, H., Miyata, M., Kume, N., Minami, M., Itabe, H., Orihara, K., Hamasaki, S., Biro, S., Otsuji, Y., Kita, T., Tei,C.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun. 241 ページ: 591-598
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Expression of lectin-like oxidized LDL receptor-1 in smooth muscle cells after vascular injury. (2006)
  • 著者名/発表者名: Eto, H., Miyata, M., Kume, N., Minami, M., Itabe, H., Orihara, K., Hamasaki, S., Biro, S., Otsuji, Y., Kita, T., Tei, C.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun vol.241 ページ: 591-598
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] ADRP/adipophilin is degraded through the proteasome-dependent pathway during regression of lipid-storing cells. (2006)
  • 著者名/発表者名: Masuda, Y., Itabe, H., Odaki, M., Hama, K., Fujimoto, Y., Mori, M, Sasabe, N., Aoki, J., Arai, H., Takano, T.
  • 雑誌名: Journal of Lipid Research 48 ページ: 87-98
• [雑誌論文] Expression of lectin-like oxidized LDL receptor-1 in smooth muscle cells after vascular injury. (2006)
  • 著者名/発表者名: Eto, H., Miyata, M., Kume, N., Minami, M., Itabe, H., Orihara, K., Hamasaki, S., Biro, S., Otsuji, Y., Kita, T., Tei, C.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun. 241 ページ: 591-598
• [雑誌論文] Role of macrophage and smooth muscle cell apoptosis in association with oxidized low-density lipoprotein in the atherosclerotic development. (2005)
  • 著者名/発表者名: Akishima Y, Akasaka Y, Ishikawa Y, Lijin Z, Kiguchi H, Ito K, Itabe H, Ishii T
  • 雑誌名: Modern Pathology 18 ページ: 365-373
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Oxidized phosphatidylcholine in alveolar macrophages in idiopathic interstitial pneumonia. (2005)
  • 著者名/発表者名: Yoshimi, N., Ikura, Y., Sugama, Y., Ohsawa, M., Hai, E., Kayo, S., Shirai, N., Yamamoto, S., Inoue, Y., Itabe, H., Yoshikawa, J., Ueda,M.
  • 雑誌名: Lung 183 ページ: 109-121
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] A redox-sensitive pathway is involved in oxidized LDL-induced downregulation of insulin-like growth factor-1 receptor. (2005)
  • 著者名/発表者名: Higashi, Y., Pen, T., Du, J., Suhkanov, S., Li, Y., Itabe, H., Parthasarathy, S., Delafontaine,P.
  • 雑誌名: Journal of Lipid Research 46 ページ: 1266-1277
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Inhibition of brain damage by edaravone,a free radical scavenger, can be monitored by plasma biomarkers that detect oxidative and astrocyte damage in patients with acute cerebral infarction. (2005)
  • 著者名/発表者名: Uno, M., Kitazata, K., Suzue, A., Matsuzaki, K., Harada, M., Itabe, H., Nagahiro,S.
  • 雑誌名: Free Radical Biology and Medicine 39 ページ: 1109-1116
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Contribution of an imbalance between oxidant-antioxidant sytems to plaque vulnerability in patients with carotid artery stenosis. (2005)
  • 著者名/発表者名: Uno, M., Kitazato, K.T., Suzue, A., Itabe, H., Hao, L., Nagahiro,S.
  • 雑誌名: Journal of Neurosurgery 103 ページ: 518-525
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Role of macrophage and smooth muscle cell apoptosis in association with oxidized low-density lipoprotein in the atherosclerotic development. (2005)
  • 著者名/発表者名: Akishima Y, Akasaka Y, Ishikawa Y, Lijun Z, Kiguchi H, Ito K, Itabe H, Ishii T
  • 雑誌名: Modern Pathology vol.18 ページ: 365-373
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Oxidized phosphatidylcholine in alveolar macrophages in idiopathic interstitial pneumonias (2005)
  • 著者名/発表者名: Yoshimi, N., Ikura, Y., Sugama, Y., Ohsawa, M., Hai, E., Kayo, S., Shirai, N., Yamamoto, S., Inoue, Y., Itabe, H., Yoshikawa, J., Ueda, M
  • 雑誌名: Lung vol.183 ページ: 109-121
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] A Redox-Sensitive Pathway is Involved in Oxidized LDL-Induced Downregulation of Insulin-like Growth Factor-1 Receptor. (2005)
  • 著者名/発表者名: Higashi, Y., Pen, T., Du, J., Suhkanov, S., Li, Y., Itabe, H., Parthasarathy, S., Delafontaine, P.
  • 雑誌名: Journal of Lipid Research vol.46 ページ: 1266-1277
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Inhibition of brain damage by edaravone, a free radical scavenger, can be monitored by plasma biomarkers that detect oxidative and astrocyte damage in patients with acute cerebral infarction. (2005)
  • 著者名/発表者名: Uno, M., Kitazato, K.T., Suzue, A., Matsuzaki, K., Harada, M., Itabe, H., Nagahiro, S.
  • 雑誌名: Free Radical Biology and Medicine vol.39 ページ: 1109-1116
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Contribution of an imbalance between oxidant-antioxidant sytems to plaque vulnerability in patients with carotid artery stenosis. (2005)
  • 著者名/発表者名: Uno, M., Kitazato, K.T., Suzue, A., Itabe, H., Hao, L, Nagahiro, S.
  • 雑誌名: Journal of Neurosurgery vol.103 ページ: 518-525
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] ADRP/adipophilin is degraded through proteasome-dependent pathway during regression of lipid-storing cells. (2005)
  • 著者名/発表者名: Masuda, Y., Itabe, H., Odaki, M., Hama, K,.Fujimoto, Y., Mori, M, Sasabe, N., Aoki, J., Arai, H, Takano, T.
  • 雑誌名: Journal of Lipid Research vol.47 ページ: 87-98
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Role of macrophage and smooth muscle cell apoptosis in association with oxidized low-density lipoprotein in the atherosclerotic development. (2005)
  • 著者名/発表者名: Akishima Y, Akasaka Y, Ishikawa Y, Lijun Z, Kiguchi H, Ito K, Itabe H, Ishii T
  • 雑誌名: Modern Pathology 18 ページ: 365-373
• [雑誌論文] Oxidized phosphatidylcholine in alveolar macrophages in idiopathic interstitial pneumonias (2005)
  • 著者名/発表者名: Yoshimi, N., Ikura, Y., Sugama, Y., Ohsawa, M., Hai, E., Kayo, S., Shirai, N., Yamamoto, S., Inoue, Y., Itabe, H., Yoshikawa, J., Ueda, M
  • 雑誌名: Lung 183 ページ: 109-121
• [雑誌論文] A Redox-Sensitive Pathway is Involved in Oxidized LDL- Induced Downregulation of Insulin-like Growth Factor-1 Receptor. (2005)
  • 著者名/発表者名: Higashi, Y., Pen, T., Du, J., Suhkanov, S., Li, Y., Itabe, H., Parthasarathy, S., Delafontaine, P.
  • 雑誌名: Journal of Lipid Research 46 ページ: 1266-1277
• [雑誌論文] Inhibition of brain damage by edaravone, a free radical scavenger, can be monitored by plasma biomarkers that detect oxidative and astrocyte damage in patients with acute cerebral infarction. (2005)
  • 著者名/発表者名: Uno, M., Kitazato, K.T., Suzue, A., Matsuzaki, K., Harada, M., Itabe, H., Nagahiro, S.
  • 雑誌名: Free Radical Biology and Medicine 39 ページ: 1109-1116
• [雑誌論文] Contribution of an imbalance between oxidant-antioxidant systems to plaque vulnerability in patients with carotid artery stenosis. (2005)
  • 著者名/発表者名: Uno, M., Kitazato, K.T., Suzue, A., Itabe, H., Hao, L., Nagahiro, S.
  • 雑誌名: Journal of Neurosurgery 103 ページ: 518-525
• [雑誌論文] Bilirubin from heme oxygenase-1 attenuates vascular endothelial activation and dysfunction against pro-inflammatory stresses. (2005)
  • 著者名/発表者名: Kawamura, K., Ishikawa, K., Wada, Y., Matsumoto, H., Itabe, H., Kodama, T., Maruyama, Y.
  • 雑誌名: Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol. 25 ページ: 155-160
• [雑誌論文] Role of macrophage and smooth muscle cell apoptosis in association with oxidized low-density lipoprotein in the atherosclerotic development. (2005)
  • 著者名/発表者名: Akishima Y, Akasaka Y, Ishikawa Y, Lijun Z, Kiguchi H, Ito K, Itabe H, Ishii T.
  • 雑誌名: Mod.Pathol. (印刷中)
• [雑誌論文] Localization of oxidized phosphatidylcholine in macrophages in idiopathic pulmonary fibrosis. (2005)
  • 著者名/発表者名: Yoshimi, N., Ikura, Y., Sugama, Y., Ohsawa, M., Hai, E., Kayo, S., Itabe, H., et al.
  • 雑誌名: Lung (印刷中)
• [雑誌論文] HDL-C levels modify the association between plasma levels of oxidatively modified LDL and coronary artery disease in men. (2004)
  • 著者名/発表者名: Zhang, B., Bai, H., Liu, R., Itabe, H., Takano, T., Saku, K.
  • 雑誌名: Metabolism 53 ページ: 423-429
• [雑誌論文] Identification of the major proteins in the lipid droplet-enriched fraction isolated from the human hepatocyte cell line HuH7. (2004)
  • 著者名/発表者名: Fujimoto, Y., Itabe, H., Sakai, J., Makita, M., et al.
  • 雑誌名: Biochim.Biophys.Acta 1644 ページ: 47-59
• [雑誌論文] Basement membrane-type heparan sulfate proteoglycan (perlecan) and low-density lipoprotein (LDL) co-localized in granulation tissues : a possible pathogenesis of cholesterol granulomas in jaw cysts. (2004)
  • 著者名/発表者名: Yamazaki, M., Cheng, J., Hao, N., Takagi, R., Jimi, S., Itabe, H., Saku, T.
  • 雑誌名: Oral Pathol.Med. 33 ページ: 177-184
• [雑誌論文] Oxidized phospholipids in oxidized low-density lipoprotein reduce the activity of tissue factor pathway inhibitor through association with its carboxy-terminal region. (2004)
  • 著者名/発表者名: Ohkura.N., Hiraishi, S., Itabe, H., et al.
  • 雑誌名: Antioxidants and Redox Signaling 6 ページ: 705-712
• [雑誌論文] Oxidized low density lipoprotein levels circulating in plasma and deposited in the tissues : Comparison between Helicobacter pylori associated gastritis and acute myocardial infarction (2004)
  • 著者名/発表者名: Kayo, S., Ohsawa, M., Ehara, S., Naruko, T., Ikura, Y., Hai, E., Yoshimi, N., Itabe, H., et al.
  • 雑誌名: American Heart Journal 148 ページ: 818-825
• [雑誌論文] 生体内酸化LDL生成、動態と血管 (2004)
  • 著者名/発表者名: 板部 洋之
  • 雑誌名: 血管医学 5 ページ: 439-446
• [雑誌論文] Measurement of oxidized LDL present in human plasma and atherosclerotic lesions. (2004)
  • 著者名/発表者名: Itabe, H., Ueda, M., Uno, M., Takano, T
  • 雑誌名: International Congress Series 1262 ページ: 87-90
• [図書] 酸化ストレスマーカー (2005)
  • 著者名/発表者名: 板部洋之
  • 総ページ数: 296
  • 出版者: 学会出版センター
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より