研究課題/領域番号 |
16590079
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研究種目 |
基盤研究(C)
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配分区分 | 補助金 |
応募区分 | 一般 |
研究分野 |
生物系薬学
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研究機関 | 岐阜大学 |
研究代表者 |
上田 浩 岐阜大学, 工学部, 助教授 (50253779)
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研究期間 (年度) |
2004 – 2005
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研究課題ステータス |
完了 (2005年度)
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配分額 *注記 |
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2005年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
2004年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
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キーワード | 三量体G蛋白質 / Rho / Rac / SRE / RhoGEF / アクチン |
研究概要 |
現在まで三量体G蛋白質共役型受容体からのシグナルが、種々の伝達経路を経て、様々な細胞運動を制御していることが報告されている。過去、我々は三量体G蛋白質からのシグナルがRhoファミリー低分子量G蛋白質を介して細胞骨格を制御することを報告している。本研究では、それらの分子機構を詳細に検討する目的で、Rhoファミリー低分子量G蛋白質を活性化するグアニンヌクレオチド交換促進因子(RhoGEF)に着目し、種々の活性化型三量体G蛋白質サブユニットにより活性化されるRhoGEFを同定することを目指した。各種RhoGEF遺伝子をかずさDNA研究所より入手し、それらの全長にタグを付加し、培養細胞で発現できるようにした。RhoGEFクローンと種々の活性化型三量体G蛋白質サブユニット遺伝子とを共発現させ、Rhoファミリーの活性化の指標としてserum response element(SRE)依存的な遺伝子発現の変動をルシフェラーゼの活性測定を用いた。その結果、NIH3T3細胞において、各種RhoGEFクローンと三量体G蛋白質βγサブユニットを共発現させSRE依存的遺伝発現を測定したところ、ARHGEF9との共発現により有意にSRE依存的遺伝子発現が上昇することが明らかになった。さらに、他のαサブユニットの活性化型変異体との共発現で、Gαsの活性化型でβγと同様に遺伝子発現が上昇することが明らかになった。さらに、これらのSRE依存的遺伝発現上昇にどのRhoファミリーが関与しているのかを調べるため、各種Rhoファミリーのドミナントネガティブ変異体を共発現したところ、Racのドミナントネガティブ体で有意に抑制された。これらのことから、このβγおよびGαsによるARHGEF9を介するSRE依存的遺伝子発現の制御はRacの活性化を介していることが示唆された。またARHGEF9以外に数種類のGEFが三量体G蛋白質のシグナルを受け制御される可能性が示唆された。
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