腫瘍抗原の同定と抗原に対する宿主免疫反応動態の解析

• 研究課題/領域番号: 16590315
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 実験病理学
• 研究機関: 岡山大学
• 研究代表者: 上中 明子 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 講師 (50273967)
• 研究期間 (年度): 2004 – 2005
• 研究課題ステータス: 完了 (2005年度)
• 配分額: 3,400千円 (直接経費: 3,400千円); 2005年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円); 2004年度: 2,400千円 (直接経費: 2,400千円)
• キーワード: 癌 / エリスポットクローニング / CTL / モノクローナル抗体 / 細胞組織 / 免疫モニタリング / トランスレーショナルリサーチ / 細胞・組織 / 腫瘍抗原 / 細胞傷害性T細胞(CTL) / エリスポトクローニング / 腎癌 / 肺癌 / Meth A / RL male 1

研究概要

(1)がん抗原の同定:培養肺癌細胞由来mRNAからcDNAライブラリーを作成し、10,000クローンを1プールとした40プールのライブラリーを作成し、第一次、2次のスクリーニングを完了。第3,第4次スクリーニングへ向けて、CTL側の調整を終了した。
(2)(2)抗原の特質解析ツールとしてのモノクローナル抗体の作出:がん・精巣抗原XAGE-1bに対するモノクローナル抗体USO9-13を、開発した簡易モノクローナル抗体作成法によって作出した。組織染色によりその反応特異性を明らかにした。さらにXAGE-1b蛋白の抗体が認識する領域を明らかにした。
(3)(3)がん免疫療法におけるT細胞免疫反応動態の解析:免疫療法における免疫反応動態の解析は重要であるが、がん抗原特異的に反応するT細胞の頻度は著しく低くその検出は困難である。そこで、T細胞免疫モニタリング法の検討および実際に使用可能な方法を検討した。モデル抗原としてインフルエンザA-24ペプチドを用いて末梢血リンパ球を刺激し、培養条件およびのアッセイ法の検討を行った。その結果、5%プール血清、IL-2 10u/mlおよびIL-7 10ng/ml添加AIM-V培地で、12日間の刺激培養で抗原特異的T細胞が効率良く検出されることを明らかにした。また、がん抗原と特異的に反応するT細胞の検出法として、エリスポット法、細胞内IFNγ検出法、IFNγ分泌細胞検出法を比較検討し、IFNγ分泌細胞検出法が高感度に検出することを明らかにした。CHP-NY-ESO-1蛋白の臨床試験におけるT細胞免疫反応動態をIFNγ分泌細胞検出法により解析した。末梢Tリンパ球をオーバーラップペプチドを用いて刺激し、再現性の高い結果が得られることを明らかにした。CD4 T細胞のモニタリングでは、4回の免疫で、約半数の症例に特異的T細胞の上昇をみとめた。

研究成果

• [雑誌論文] In vitro stimulation of CD8 and CD4 T-cells by dendritic cells loaded with a complex of cholesterol-bearing hydrophobized pullulan and NY-ESO-1 protein; identification of a new HLA-DR15-binding CD4 T-cell epitope. (2006)
  • 著者名/発表者名: Hasagawa, K., et al.
  • 雑誌名: Clin. Cancer Res. 12 ページ: 1921-1927
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] In vitro stimulation of CD8 and CD4 T cells by dendritic cells loaded with a complex of cholesterol-bearing hydrophobized pullulan and NY-ESO-1 protein : Identification of anew HLA-DR15-binding CD4 T-cell epitope. (2006)
  • 著者名/発表者名: Hasegawa K., Noguchi Y., Koizumi F., Uenaka A, Tanaka M, Shimono M., Nakamura H., Shiku H., Gnjatic S., Murphy R., Hiramatsu Y., Old LJ., Nakayama E.
  • 雑誌名: Clin Cancer Res 12(6) ページ: 1921-1927
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] XAGE-1 expression in non-small cell lung cancer and antibody response in patients. (2005)
  • 著者名/発表者名: Nakagawa, K., et al.
  • 雑誌名: Clin. Cancer Res. 11 ページ: 5496-5503
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Identification of glionoma-specific RFX4-E and -F isoforms and humoral immune response in patients. (2005)
  • 著者名/発表者名: Matsushita, K., et al.
  • 雑誌名: Cancer Sci. 96 ページ: 801-809
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Identification of an HLA-A24-restricted OY-TES-1 epitope recognized by cytotoxic T cells. (2005)
  • 著者名/発表者名: Okumura, H., et al.
  • 雑誌名: Microbiol. Immunol 49 ページ: 1009-1016
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] XAGE-1 expression in non-small cell lung cancer and antibody response in patients. (2005)
  • 著者名/発表者名: Nakagawa K., Noguchi Y., Uenaka A., Sato S., Okumura H., Tanaka M., Shimono M., Eldib AMA., Ono T., Ohara N., Yoshino T., Yamashita K., Tsunoda T., Aoe M., Shimizu N., Nakayama E.
  • 雑誌名: Clin Cancer Res 11(15) ページ: 5496-5503
  • NAID: 10019731000
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Identification of glioma-specific RFX4-E and -F isoforms and humoral immune response in patients. (2005)
  • 著者名/発表者名: Matsusita H., Uenaka A., Ono T., hasegawa K., Sato S., Koizumi F., Nakagawa K., Toda M., shingo T., Ichikawa T., Noguchi Y., Tamiya T., Furuta T., Kawase T., Date I., Nakayama E.
  • 雑誌名: Cancer Sci 96(11) ページ: 801-809
  • NAID: 10017091755
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Identification of an HLA-A24-restricted OY-TES-1 epitope recognized by cytotoxic T-cells. (2005)
  • 著者名/発表者名: Okumura H., Noguchi Y., Uenaka A., Aji T., Ono T., Nakagawa E.
  • 雑誌名: Microbiol.Immunol. 49(11) ページ: 1009-1016
  • NAID: 10016787672
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] XAGE-1 expression in non-small cell lung cancer and antibody response in patients. (2005)
  • 著者名/発表者名: Nakagawa, K., et al.
  • 雑誌名: Clin.Cancer Res. 11 ページ: 5496-5503
• [雑誌論文] Identification of glioma-specific RFX4-E and -F isoforms and humoral immune esponse in patients. (2005)
  • 著者名/発表者名: Matsushita, K., et al.
  • 雑誌名: Cancer Sci. 96 ページ: 801-809
• [雑誌論文] Identification of an HLA-A24-restricted OY-TES-1 epitope recognized by cytotoxic T cells. (2005)
  • 著者名/発表者名: Okumura, H., et al.
  • 雑誌名: Microbiol.Immunol. 49 ページ: 1009-1016
• [雑誌論文] In vitro stimulation of CD8 and CD4 T-cells by dendritic cells loaded with a complex of cholesterol-bearing hydrophobized pullulan and NY-ESO-1 protein : identification of a new HLA-DR15-binding CD4 T-cell epitope. (2005)
  • 著者名/発表者名: Hasegawa, K., et al.
  • 雑誌名: Clin.Cancer Res. (In press)
• [雑誌論文] Analysis of CD8 T-cell response by IFNγ ELISPOT and H-2L^d/pRL1a tetramer assays in pRL1a multiple antigen peptide-immunized and RL male 1-bearing BALB/c and (BALB/c XC57BL/6)F_1 mice. (2004)
  • 著者名/発表者名: Takada I., Noguchi Y., Kenjo A., Wada H., uenaka A., Fujita T., Inoue H., Nakayama E.
  • 雑誌名: Cancer Sci 95(3) ページ: 254-259
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Inhibition of RL male 1 tumor growth in BALB/c mice by introduction of the RLakt gene coding for antigen recognized by cytotoxic T-lymphocytes and the GM-CSF gene by in vivo electroporation. (2004)
  • 著者名/発表者名: Tanaka M., Yamada M., Ono T., Noguchi Y., Uenaka A., Nakayama E.
  • 雑誌名: Cancer Sci 95(2) ページ: 154-159
  • NAID: 80016540021
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Analysis of CD8 T-cell response by IFNgamma ELISPOT and H-2L(d)/pRLla tetramer assays in pRL1a multiple antigen peptide-immunized and RL male 1-bearing BALB/c and (BALB/c x C57BL/6)F(1) mice. (2004)
  • 著者名/発表者名: Itsuo Takada
  • 雑誌名: Cancer Sci.ence 95・3 ページ: 254-259
• [雑誌論文] Inhibition of RL male 1 tumor growth in BALB/c mice by introduction of the RLakt gene coding for antigen recognized by cytotoxic T-lyrnphocytes and the GM-CSF gene by in vive electroporation. (2004)
  • 著者名/発表者名: Motoyuki Tanaka
  • 雑誌名: Cancer Sci.ence 95・2 ページ: 154-159
• [図書] 臨床免疫学(上)(-基礎研究の進歩と最新の臨床-)(日本臨床増刊号) (2005)
  • 著者名/発表者名: 上中明子, 中山睿一
  • 総ページ数: 710
  • 出版者: 日本臨床社
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [図書] 免疫学的プロトコール (2004)
  • 著者名/発表者名: 田中志幸, 上中明子, 中山睿一, 中内啓光編
  • 総ページ数: 243
  • 出版者: 羊土社
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [図書] タンパク質研究のための抗体実験マニュアル(高津 聖志/三宅 健介/山元 弘/瀧 伸介/編) (2004)
  • 著者名/発表者名: 上中 明子
  • 総ページ数: 194
  • 出版者: 羊土社
• [図書] 免疫学的プロトコール(中内 啓光/編) (2004)
  • 著者名/発表者名: 田中志幸
  • 総ページ数: 243
  • 出版者: 羊土社