| 研究課題/領域番号 |
16590369
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
細菌学(含真菌学)
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| 研究機関 | 北里大学 |
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研究代表者 |
熊沢 義雄 北里大学, 理学部, 教授 (30072375)
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| 研究分担者 |
滝本 博明 北里大学, 理学部, 講師 (00253534)
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| 研究期間 (年度) |
2004 – 2005
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| 研究課題ステータス |
完了 (2005年度)
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| 配分額 *注記 |
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2005年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
2004年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
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| キーワード | モルモット / 結核菌糖脂質 / CD1 / サイトカイン / IL-12 / IFN-γ / 単クローン抗体 |
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| 研究概要 |
結核は、結核菌のタンパク質や脂質成分に対する免疫応答に基づく慢性疾患である。脂質抗原のT細胞への抗原提示は、主にCD1bにより行われている。マウスには、CD1b遺伝子がないため脂質抗原に対する免疫応答の解析には適さないが、モルモットにはヒトCD1bに相当する分子が存在する。しかし、モルモットを用いた免疫応答の解析をするための、サイトカインの測定系などのツールが数少ない。本研究では、結核菌糖脂質をモルモットに免疫し、脂質抗原に対する免疫応答を解析することと、モルモットサイトカインの測定系を確立することを目的としている。
Hartley系モルモットに、タンパク抗原として結核菌由来組換えCFP10、卵白アルブミンおよび脂質抗原として結核菌由来粗脂質画分を免疫し、経時的に遅延型過敏症、抗体価の測定およびT細胞増殖応答を測定した。結核菌糖脂質に対する抗体は主にIgG2であり、Th1優位な反応が認められた。結核菌糖脂質に対して遅延型過敏症が誘導され、T細胞の増殖応答も誘導された。T細胞をCD4陽性T細胞とCD8陽性T細胞に分画して結核菌糖脂質に対する増殖応答を検討した結果、CD4およびCD8陽性T細胞ともに増殖応答が認められた。
モルモットのサイトカインの測定系を確立するため、Th1反応に重要なIL-12およびIFN-γの組換えサイトカインを精製し、単クローン抗体の作製を行った。組換えIL-12p35およびIL-12p40のヘテロ二量体をバキュロウイルスの系で作製した。精製した組換えIL-12をマウスに免疫し、常法に従って単クローン抗体を作製した。得られた6クローンの単クローン抗体の中に中和活性があるのも認めた。これらを用いてELISAの条件検討を行ったが、IL-12の測定系の確立には至らなかった。IFN-γに関しても、組換えIFN-γをバキュロウイルスの系で作製し、単クローン抗体を作製したが、IFN-γの測定系の確立迄には至らなかった。
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