プロテアソームによるC型肝炎ウイルス感染機構への影響

• 研究課題/領域番号: 16590385
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: ウイルス学
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 森石 恆司 大阪大学, 微生物病研究所, 助教授 (90260273)
• 研究期間 (年度): 2004 – 2005
• 研究課題ステータス: 完了 (2005年度)
• 配分額: 3,600千円 (直接経費: 3,600千円); 2005年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円); 2004年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
• キーワード: C型肝炎ウイルス / HCV / C型肝炎 / プロテアソーム / PA28γ / シグナルペプチド

研究概要

肝癌は我が国の癌死の第3位を占める肝臓細胞癌の原因の8割がC型肝炎による。原因ウイルスであるC型肝炎ウイルス(HCV)のコア蛋白質はその脂肪肝および肝細胞癌発症に深く関わっている。本研究では、HCVコア蛋白質の成熟過程と病原性発現機構の詳細を明らかにし、宿主蛋白質を標的とした新規治療法開発の基盤確立を目的としている。
1)PA28γによるコア蛋白質の成熟週程への影響
RNA干渉によるPA28γ発現抑制のために、PA28γに対するsiRNA標的遺伝子配列をU6プロモーターで発現することによって決定し、培養細胞におけるPA28γの発現を大幅に抑制することに成功した。この細胞を解析したところ、翻訳後の修飾あるいは転写調節による脂肪合成および細胞増殖に関与する蛋白質の増減が観察された。膜内切断酵素SPPによる切断に必須なコア蛋白質内のアミノ酸残基および小胞体局在に必須なコア蛋白質内の領域を139-144アミノ酸と176-177アミノ酸領域と同定した。コア蛋白質とE1蛋白質はウイルス粒子を形成するために必須の構造蛋白質である。粒子形成をする際、E1の膜貫通領域を介して、コア蛋白質は結合することが予想され、その結合にはコア蛋白質多量体形成が重要であることがわかった。
2)SPPおよびPA28γによるコア蛋白質の活性調節
ヒト細胞内のSPPによる膜貫通領域の切断部位をMALDI-TOF/MSで同定した。また、SPPによる切断によってコア蛋白質の細胞内画分に変化が認められた。PA28γに対する標的配列を決定し、short hairpin RNAによるPA28γの発現調節を培養細胞レベルで行った。その結果、PA28γ発現およびコア蛋白質の発現に伴って、核内プロテアソーム活性が上昇していることが分かった。

研究成果

• [雑誌論文] Characterization of HCV-like particles produced in a human hepatoma cell line by a recombinant baculovirus (2006)
  • 著者名/発表者名: Matsuo, E.
  • 雑誌名: Biochemical and Biophysical Research Communication 340 ページ: 200-208
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Molecular determinants for subcellular localization of Hepatitis C virus core protein (2005)
  • 著者名/発表者名: Suzuki, R.
  • 雑誌名: Journal of Virology 79 ページ: 1271-1281
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] involvement of the Toll-Like Receptor 9 Signaling Pathway in the Induction of Innate Immunity by Baculovirus (2005)
  • 著者名/発表者名: Abe, T.
  • 雑誌名: Journal of Virology 79 ページ: 2847-2858
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Ligand-directed Gene Targeting to Mammalian Cells by Pseudotype Baculoviruses (2005)
  • 著者名/発表者名: Y.Kitagawa.
  • 雑誌名: Journal o f Virology 79 ページ: 3639-3652
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Nuclear Localization of Japanese Encephalitis Virus Core Protein Enhances Viral Replication. (2005)
  • 著者名/発表者名: Mori, Y.
  • 雑誌名: Journal of Virology 79 ページ: 3448-3458
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Human VAP-B Is Involved in Hepatitis Virus Replication through Interaction with NS5A and NS5B (2005)
  • 著者名/発表者名: Hamamoto, I.
  • 雑誌名: Journal of Virology 79 ページ: 13473-13482
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Characterization of HCV-like particles produced to a human hepatoma cell line by a recombinant baculovirus (2005)
  • 著者名/発表者名: Matsuo, E.
  • 雑誌名: Biochem.Biophys.Res.Commun 340 ページ: 200-208
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Molecular determinants for subcellular localization of hepatitis C virus core protein (2005)
  • 著者名/発表者名: Suzuki, R.
  • 雑誌名: The Journal of Virology 79 ページ: 1271-1281
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Nuclear localization of Japanese encephalitis virus core protein enhances viral replication (2005)
  • 著者名/発表者名: Mori, Y.
  • 雑誌名: The Journal of Virology 79 ページ: 3448-3458
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Ligand-directed Gene Targeting to Mammalian Cells by Pseudotype Baculoviruses. (2005)
  • 著者名/発表者名: Kitagawa, Y.
  • 雑誌名: The Journal of Virology 79 ページ: 3639-3652
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Human VAP-B Is Involved in Hepatitis C Virus Replication through Interaction with NS5A and NS5B (2005)
  • 著者名/発表者名: Hamamoto, I.
  • 雑誌名: The Jounal of Virology 79 ページ: 13473-13482
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Involvement of the toll-like receptor 9 signaling pathway in the induction of innate immunity by baculovirus (2005)
  • 著者名/発表者名: Abe, T.
  • 雑誌名: The Jounal of Virology 79 ページ: 2847-2858
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Molecular determinants for subcellular localization of Hepatitis C virus core protein (2005)
  • 著者名/発表者名: Suzuki, R., S.Sakamoto, T.Tsutsumi, A.Rikimaru, K.Tanaka, T.Shimoike, K.Moriishi, T.Iwasaki, K.Mizumoto, Y.Matsuura, T.Miyamura, T.Suzuki
  • 雑誌名: Journal of Virology 78 ページ: 1271-1281
• [雑誌論文] Involvement of the Toll-Like Receptor 9 Signaling Pathway in the Induction of Innate Immunity by Baculovirus (2005)
  • 著者名/発表者名: Abe T., H.Henmi, K.Moriishi, S.Tamura, H.Takaku, S.Akira, Y.Matsuura
  • 雑誌名: Journal of Virology 79 ページ: 2847-2858
• [雑誌論文] Ligand-directed Gene Targeting to Mammalian Cells by Pseudotype Baculoviruses (2005)
  • 著者名/発表者名: Y.Kitagawa, H.Tani, C.K.Limn, T.Matsunaga, K.Moriishi, Y.Matsuura
  • 雑誌名: Journal of Virology 79 ページ: 3639-3652
• [雑誌論文] Nuclear Localization of Japanese Encephalitis Virus Core Protein Enhances Viral Replication. (2005)
  • 著者名/発表者名: Mori, Y., T.Okabayashi, T.Yamashita, Z.Zhao, T.Wakita, K.Yasui, F.Hasabe, M.Tadano, E.Konishi, K.Moriishi, Y.Matsuura
  • 雑誌名: Journal of Virology 79 ページ: 3448-3458
• [雑誌論文] Human VAP-B Is Involved in Hepatitis C Virus Replication through Interaction with NS5A and NS5B (2005)
  • 著者名/発表者名: Hamamoto, I., Y.Nishimura, T.Okamoto, H.Aizaki, M.Liu, Y.Mori, T.Abe, T.Suzuki, M.M.Lai, T.Miyamura, K.Moriishi, Y.Matsuura
  • 雑誌名: Journal of Virology 79 ページ: 13473-13482
• [雑誌論文] Characterization of HC V-like particles produced in a human hepatoma cell line by a recombinant baculovirus (2005)
  • 著者名/発表者名: Matsuo, E., H.Tani, C.K.Lim, Y.Komoda, T.Okamoto, H.Miyamoto, K.Moriishi, S.Yagi, A.H.Patel, T.Miyamura, Y.Matsuura
  • 雑誌名: Biochem.Biophys.Res.Commun 340 ページ: 200-208
• [雑誌論文] Involvement of the Toll-Like Receptor 9 Signaling Pathway in the Induction of Innate Immunity by Baculovirus. (2005)
  • 著者名/発表者名: Abe, T., H.Henmi, K.Moriishi, S.Tamura, H.Takaku, S.Akira, Y.Matsuura
  • 雑誌名: Journal of Virology 79(印刷中)
• [雑誌論文] Ligand-directed Gene Targeting to Mammalian Cells by Pseudotype Baculoviruses. (2005)
  • 著者名/発表者名: Y.Kitagawa, H.Tani, C.K.Limn, T.Matsunaga, K.Moriishi, Y.Matsuura
  • 雑誌名: Journal of Virology 79(印刷中)
• [雑誌論文] Nuclear Localization of Japanese Encephalitis Virus Core Protein Enhances Viral Replication. (2005)
  • 著者名/発表者名: Mori, Y., T.Okabayashi, T.Yamashita, Z.Zhao, T.Wakita, K.Yasui, F.Hasabe, M.Tadano, E.Konishi, K.Moriishi, Y.Matsuura
  • 雑誌名: Journal of Virology 79(印刷中)
• [雑誌論文] Intramembrane proteolysis and endoplasmic reticulum retention of hepatitis C virus core protein. (2004)
  • 著者名/発表者名: Okamoto, K.
  • 雑誌名: Journal of Virology 78 ページ: 6370-6380
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Intramembrane proteolysis and endoplasmic reticulum retention of hepatitis C virus core protein. (2004)
  • 著者名/発表者名: Okamoto, K.
  • 雑誌名: The Journal of Virology 78 ページ: 6370-6380
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Intramembrane proteolysis and endoplasmic reticulum retention of hepatitis C virus core protein. (2004)
  • 著者名/発表者名: Okamoto, K., K.Moriishi, T.Miyamura, Y.Matsuura.
  • 雑誌名: Journal of Virology 78 ページ: 6370-6380