C型肝炎ウイルスの複製効率と薬剤感受性を規定するウイルス遺伝子領域の解析

• 研究課題/領域番号: 16590396
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: ウイルス学
• 研究機関: (財)東京都医学研究機構
• 研究代表者: 宮本 道子 (財)東京都医学研究機構, 東京都神経科学総合研究所, 研究員 (40190821)
• 研究分担者: 脇田 隆字 (財)東京都医学研究機構, 東京都神経科学総合研究所, 副参事研究員 (40280789) ; 加藤 孝宣 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 助手 (20333370)
• 研究期間 (年度): 2004 – 2005
• 研究課題ステータス: 完了 (2005年度)
• 配分額: 3,600千円 (直接経費: 3,600千円); 2005年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円); 2004年度: 2,600千円 (直接経費: 2,600千円)
• キーワード: HCV / ウイルス / ウイルスゲノム複製 / 肝臓癌 / 慢性肝炎 / インターフェロン / レプリコン / リバビリン

研究概要

本研究の目的は、C型肝炎ウイルス(HCV)のレプリコンシステムを用い、HCVのRNA複製効率とインターフェロン(IFN)などの薬剤に対する感受性を規定するウィルスゲノムの領域を明らかにすることである。分子進化学的解析、レプリコンの手法やHCVのウィルス培養系を組み合わせることにより、ウィルスRNAの複製効率やウイルス複製の薬剤感受性に関与するウイルスゲノムの領域の同定を試みた。
複製効率の異なるレプリコンの遺伝子配列の比較による責任領域の推定:
これまでの解析からHCV株のなかにレプリコンとして複製可能なJFH-1とJFH-2株の遺伝子配列を他の慢性肝炎患者由来株と比較すると、NS5Aの領域で最も変異が強いことがわかった。この領域はIFNの感受性に関係することが報告されているが、複製効率との関連は不明である。
JFH-1株と他のウイルス株とのキメラウイルスを作製して、ウイルス複製、ウィルス粒子形成分泌などに重要なウイルス遺伝子領域を同定した。ウイルス複製に重要な領域は5'非翻訳領域、NS3ヘリカーゼ領域、NS5bのRNAポリメラーゼ領域であった。さらにこの領域の他にウィルス粒子形成分泌に重要な領域が存在することが明らかとなった。
臨床的には遺伝子型1bと2aでは明らかにIFNなどの治療に対する反応性が異なることが知られているが、その違いのメカニズムは全く不明である。IFNをレプリコン細胞に添加することによりウイルス複製を容量依存性に抑制することが可能であった。また、これまでリバビリンの作用機序はその変異誘導によると考えられていた。しかし、リバビリンをレプリコン細胞に添加するとウィルス複製は抑制されるが変異の誘導は観察されなかった。従って、リバビリンが直接ウイルス複製を抑制していることが示唆された。
最近HCVに対する新たな抗ウイルス剤としてサイクロスポリンAが注目されており、またRNAポリメラーゼの阻害薬なども実用化されつつある。これまで遺伝子型1bのレプリコンに対してサイクロスポリンが効率よく複製を阻害することが報告されている。今回、遺伝子型2aのレプリコンに対してもサイクロスポリンが有効であることが明らかとなった。しかし、その作用機序は遺伝子型により異なることも示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Characterization of Genotype 2a Hepatitis C Virus Subgenomic Replicon in Comparison with Genotype 1b Replicon (2006)
  • 著者名/発表者名: M Miyamoto, et al.
  • 雑誌名: Intervirology 49 ページ: 37-43
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Production of infectious genotype 1a hepatitis C virus (Hutchinson strain) in cultured human hepatoma cell (2006)
  • 著者名/発表者名: Yi M, et al.
  • 雑誌名: Proc Natl Acad Sci USA 103(7) ページ: 2310-5
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Generation of infectious hepatitis C virus in immortalized human hepatocytes. (2006)
  • 著者名/発表者名: T Kanda, A Basu, R Steele, T Wakita, JS.Ryerse, R Ray, RB Ray.
  • 雑誌名: Journal of Virology (in press)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Characterization of the replication sensitivity to cyclosporin A among strains of hepatitis C virus (2006)
  • 著者名/発表者名: N Ishii, K Watashi, T Hishiki, K Goto, D Inoue, M Hijikata, T Wakita, N Kato, K Shimotohno
  • 雑誌名: Journal of Virology (in press)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Subcellular localization of hepatitis C virus structural proteins in a cell culture system that efficiently replicates the virus. (2006)
  • 著者名/発表者名: Y Rouille, F Helle, D Deigrange, P Roingeard, C Voisset, E Blanchard, S Belouzard, J McKeating, A Patel, G Maertens, T Wakita, C Wychowski, J Dubuisson
  • 雑誌名: Journal of Virology (in press)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Production of infectious genotype is hepatitis C virus (Hutchinson strain) in cultured human hepatoma cells. (2006)
  • 著者名/発表者名: Yi M, Villanueva RA, Thomas DL, Wakita T, Lemon SM.
  • 雑誌名: Proc Nat Acad Sci USA. 103(7) ページ: 2310-2315
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Characterization of Genotype 2a Hepatitis C Virus Subgenomic Replicon in Comparison with Genotype 1b Replicon. (2006)
  • 著者名/発表者名: M Miyamoto, T Kato, T Date, M Mizokami, T Wakita.
  • 雑誌名: Intervirology 49 ページ: 37-43
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Non-Hepatic Cell Lines HeLa and 293 Cells Support Efficient Replication of Hepatitis C Virus Genotype 2a Subgenomic Replicon. (2005)
  • 著者名/発表者名: T Kato, et al.
  • 雑誌名: Journal of Virology 79 ページ: 592-596
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Nuclear Localization of Japanese Encephalitis Virus Core Protein Enhances Viral Replication (2005)
  • 著者名/発表者名: Y Mori, et al.
  • 雑誌名: Journal of Virology 79 ページ: 3448-58
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Characterisation of the E-138 (Glu/Lys) mutation in Japanese encephalitis virus using a stable full-length infectious cDNA clone (2005)
  • 著者名/発表者名: Zhao Z, et al.
  • 雑誌名: Journal of General Virology 86 ページ: 2209-2220
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Production of Infectious Hepatitis C Virus in Tissue Culture from a Cloned Viral Genome (2005)
  • 著者名/発表者名: T Wakita, et al.
  • 雑誌名: Nature Medicien 11 ページ: 791-796
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Robust Hepatitis C Virus Infection in Vitro (2005)
  • 著者名/発表者名: J Zhong, et al.
  • 雑誌名: Proc Natl Acad Sci USA 102 ページ: 9294-9299
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Robust production of infectious hepatitis C virus (HCV) from stably HCV cDNA-transfeted humanhepatoma cells (2005)
  • 著者名/発表者名: Cai Z, et al.
  • 雑誌名: Journal of Virology 79 ページ: 13963-73
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Detection of Anti-Hepatitis C Virus Effects of Interferon and Ribavirin by a Sensitive Replicon System (2005)
  • 著者名/発表者名: T Kato, et al.
  • 雑誌名: Journal of Clinical Microbiology 43 ページ: 5679-84
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] 遺伝子型2aのC型肝炎ウイルス(HCV)由来のRNAレプリコン (2005)
  • 著者名/発表者名: 脇田隆字
  • 雑誌名: バイオテクノロジージャーナル 5(3) ページ: 300-2
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] 宿主の新たな抗ウイルス活性によるB型肝炎ウイルス複製の抑制 (2005)
  • 著者名/発表者名: 脇田隆字
  • 雑誌名: Hepatoday 9 ページ: 6-7
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] 感染性C型肝炎ウイルス粒子の培養細胞における作製 (2005)
  • 著者名/発表者名: 脇田隆字
  • 雑誌名: 医学のあゆみ 215(11) ページ: 920-1
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] C型肝炎ウイルス培養細胞感染系の確立 (2005)
  • 著者名/発表者名: 加藤孝宣, 他
  • 雑誌名: ウイルス 55(2) ページ: 287-296
  • NAID: 10017102684
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] HCVレプリコン (2005)
  • 著者名/発表者名: 脇田隆字
  • 雑誌名: 肝臓 46(12) ページ: 691-702
  • NAID: 10020605421
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Detection of Anti-Hepatitis C Virus Effects of Interferon and Ribavirin by a Sensitive Replicon System (2005)
  • 著者名/発表者名: T Kato, T Date, M Miyamoto, M Sugiyama, Y Tanaka, E Orito, T Ohno, K Sugihara, I Hasegawa, K Fujiwara, K Ito, A Ozasa, M Mizokami, T Wakita.
  • 雑誌名: Journal of Clinical Microbiology 43 ページ: 5679-5684
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Robust production of infectious hepatitis C virus (HCV) from stably HCV cDNA-transfeted humanhepatoma cells. (2005)
  • 著者名/発表者名: Cai Z, Zhang C, Chang K-Y, Jiang J, Ahn B-C, Wakita T, Liang, JT, Luo G.
  • 雑誌名: Journal of Virology. 79 ページ: 13963-13973
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Robust Hepatitis C Virus Infection in Vitro (2005)
  • 著者名/発表者名: J Zhong, P Gastaminza, G Cheng, S Kapadia, T Kato, DR Burton, SF Wieland, S Uprichard, T Wakita, FV Chisari
  • 雑誌名: PNAS 2005 102 ページ: 9294-9299
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Production of Infectious Hepatitis C Virus in Tissue Culture from a Cloned Viral Genome (2005)
  • 著者名/発表者名: T Wakita, T Pietschmann, T Kato, T Date, M Miyamoto, Z Zhao, K Murthy, A Habermann, H-G Krausslich, M Mizokami, R Bartenschlager, T J Liang
  • 雑誌名: Nat Med. 11 ページ: 791-796
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Characterisation of the E-138 (Glu/Lys) mutation in Japanese encephalitis virus using a stable full-length infectious cDNA clone (2005)
  • 著者名/発表者名: Zhao Z, Date T, Li Y, Kato T, Miyamoto M, Yasui K, Wakita T.
  • 雑誌名: J.Gen.Virol. 86 ページ: 2209-2220
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Nuclear Localization of Japanese Encephalitis Virus Core Protein Enhances Viral Replication (2005)
  • 著者名/発表者名: Y Mori, T Okabayashi, T Yamashita, Z Zhao, T Wakita, K Yasui, F Hasebe, M Tadano, E Konishi, K Moriishi, Y Matsuura.
  • 雑誌名: J Virol. 79 ページ: 3448-3458
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Non-Hepatic Cell Lines HeLa and 293 Cells Support Efficient Replication of Hepatitis C Virus Genotype 2a Subgenomic Replicon. (2005)
  • 著者名/発表者名: T Kato, T Date, M Mivamoto, Z Zhao, M Mizokami, T Wakita
  • 雑誌名: J Virol 79 ページ: 592-596
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Robust production of infectious hepatitis C virus (HCV) from stably HCV cDNA-transfeted humanhepatoma cells (2005)
  • 著者名/発表者名: Cai Z, et al.
  • 雑誌名: Journal of General Virology 79 ページ: 13963-13973
• [雑誌論文] Non-Hepatic Cell Lines HeLa and 293 Cells Support Efficient Replication of Hepatitis C Virus Genotype 2a Subgenomic Replicon. (2005)
  • 著者名/発表者名: T Kato, T Date, M Miyamoto, Z Zho, M Mizokami, T Wakita
  • 雑誌名: Journal of Virology 79 ページ: 592-596
• [雑誌論文] Nuclear Localization of Japanese Encephalitis Virus Core Protein Enhances Viral Replication (2005)
  • 著者名/発表者名: Y Mori, T Okabayashi, T Yamashita, Z Zhao, t Wakita, et al.
  • 雑誌名: Journal of Virology 79 ページ: 3448-3458
• [雑誌論文] Genotype 2a Hepatitis C Virus Subgenomic Replicon Can Replicate in HepG2 and IMY-N9 cells (2004)
  • 著者名/発表者名: Date T, et al.
  • 雑誌名: Journal of Biological Chemistry 279 ページ: 22371-6
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Regulation of Hepatitis C Virus Replication by interferon Regulatory Facctor-1 (2004)
  • 著者名/発表者名: Kanazawa N, et al.
  • 雑誌名: Journal of Virology 78 ページ: 9713-20
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Difference of Hepatitis C Virus Core Protein Processing between Genotypes 1 and 2. (2004)
  • 著者名/発表者名: T Kato, et al.
  • 雑誌名: Hepatology Research 30 ページ: 204-209
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] HCV repliconに関する研究 (2004)
  • 著者名/発表者名: 脇田隆字
  • 雑誌名: 臨床消化器内科 19 ページ: 1545-7
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] HCV repliconによるHCV RNA複製 (2004)
  • 著者名/発表者名: 脇田隆字
  • 雑誌名: 細胞 36・7 ページ: 293-6
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Difference of Hepatitis C Virus Core Protein Processing between Genotypes 1 and 2. (2004)
  • 著者名/発表者名: T Kato, M Miyamoto, T Date, A Furusaka, M Mizokami, T Wakita
  • 雑誌名: Hepatology Research 30 ページ: 204-209
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Regulation of Hepatitis C Virus Replication by Interferon Regulatory Facctor-1 (2004)
  • 著者名/発表者名: Kanazawa N, Kurosaki M, Sakamoto N, Enomoto N, Itsui Y, Yamashiro T, Tanabe Y, Maekawa S, Nakagawa M, Chen C-H, Oshima S, Nakamura T, Kato T, Wakita T, Watanabe M
  • 雑誌名: J Virol 78 ページ: 9713-9720
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Genotype 2a Hepatitis C Virus Subgenomic Replicon Can Replicate in HepG2 and IMY-N9 cells (2004)
  • 著者名/発表者名: Date T, Kato T.Mivamoto M, Zhao Z, Yasui K, Mizokami M, Wakita T.
  • 雑誌名: Journal of Biological Chemistry 279 ページ: 22371-22376
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Genotype 2a Hepatitis C Virus Subgenomic Replicon Can Replicate in HepG2 and IMY-N9 cells (2004)
  • 著者名/発表者名: Date T, Kato T, Miyamoto M, Zhao Z, Yasui K, Mizokami M, Wakita T
  • 雑誌名: Journal of Biological Chemistry 279 ページ: 22371-22376
• [雑誌論文] Regulation of Hepatitis C Virus Replication by Interferon Regulatory Facctor-1 (2004)
  • 著者名/発表者名: Kanazawa N, Kurosaki M, Sakamoto N, et al.
  • 雑誌名: Journal of Virology 78 ページ: 9713-9720